切割載體是什麼
Ⅰ 什麼是構建載體
基因表達載體的構建(即目的基因與運載體結合)是實施基因工程的第二步,回也是基因工程的核心。 將目的答基因與運載體結合的過程,實際上是不同來源的DNA重新組合的過程。如果以質粒作為運載體, 首先要用一定的限制酶切割質粒,使質粒出現一個缺口,露出黏性末端。然後用同
一種限制酶切斷目的基因,使其產生相同的黏性末端(部分限制性內切酶可切割出平末端,擁有相同效果)。將切下的目的基因的片段插入質粒的切口處,首先鹼基互補配對結合,兩個黏性末端吻合在一起,鹼基之間形成氫鍵,再加入適量DNA連接酶,催化兩條DNA鏈之間形成磷酸二酯鍵,從而將相鄰的脫氧核糖核酸連接起來,形成一個重組DNA分子。如人的胰島素基因就是通過這種方法與大腸桿菌中的質粒DNA分子結合,形成重組DNA分子(也叫重組質粒)的。
農桿菌可以做質粒載體的宿主細胞,但有些條件,比如必須是雙子葉植物,或者是裸子植物~具體看鏈接吧,還有不懂的,追問吧
Ⅱ 在什麼情況下,切割目的基因和載體時使用不同種限制酶
如果要獲得互補的缺口用於連接,而載體或目標片段上又有多個酶切位點,如果有同尾酶的話就可以使用。一般情況下切割載體和目的基因需要使用相同的酶,偶爾也會使用不同的同尾酶。
Ⅲ 什麼叫載體
載體(Vector) ,指在基因工程重組DNA技術中將DNA片段(目的基因)轉移至受體細胞回的一種能自我復制的DNA分子。答三種最常用的載體是細菌質粒、噬菌體和動植物病毒。
載體必須在宿主細胞中能保存下來並能大量復制,且對受體細胞無害,不影響受體細胞正常的生命活動。有多個限制酶(Restriction enzymes)切點,而且每種酶的切點最好只有一個,如大腸桿菌pBR322就有多種限制酶的單一識別位點,可適於多種限制酶切割的DNA插入。
(3)切割載體是什麼擴展閱讀:
質粒和噬菌體載體只能在細菌中繁殖,不能滿足真核DNA重組需要。感染動物的病毒可改造用作動物細胞的載體。由於動物細胞的培養和操作較復雜、花費也較多,因而病毒載體構建時一般都把細菌質粒復制起始序列放置其中。使載體及其攜帶的外來序列能方便地在細菌中繁殖和克隆,然後再引入真核細胞。
Ⅳ 切割運載體和目的基因往往是用同一種限制酶還是兩種
往往是一種。不過我看為了准確,兩種更好一點。用同一種的話,可能會自身環化
Ⅳ 基因工程中,切割目的基因和載體
切割載體和含有目的基因的DNA片段後形成的黏性末端,只有存在互補序列才能連接形成重組DNA片段,欲獲得存在互補鹼基序列的黏性末端一般需使用同種限制酶切割.
故選:A.
Ⅵ 「載體」什麼意思
英文單詞 ,在基因工程重組DNA技術中將DNA片段(目的基因)轉移至受體細胞的一種能自我復制的DNA分子。三種最常用的載體是細菌質粒、噬菌體和細菌病毒和動植物病毒。
運載體
在基因操作過程中使用運載體有兩個目的:一是用它作為運載工具,將目的基因轉移到宿主細胞中去;二是利用它在宿主細胞內對目的基因進行大量的復制(稱為克隆)。現在所用的運載體主要有兩類:一類是細菌細胞質的質粒,它是一種相對分子質量較小、獨立於染色體DNA之外的環狀DNA(一般有1~200 kb左右,kb為千鹼基對),有的一個細菌中有一個,有的一個細菌中有多個。質粒能通過細菌間的接合由一個細菌向另一個細菌轉移,可以獨立復制,也可整合到細菌染色體DNA中,隨著染色體DNA的復制而復制。另一類運載體是噬菌體或某些病毒等。現在人們還在不斷尋找新的運載體,如葉綠體或線粒體DNA等也有可能成為運載體。
作為運載體必須具有三個條件
:①在宿主細胞中能保存下來並能大量復制;②有多個限制酶切點,而且每種酶的切點最好只有一個,如大腸桿菌pBR322就有多種限制酶的單一識別位點,可適於多種限制酶切割的DNA插入;③有一定的標記基因,便於進行篩選。如大腸桿菌的pBR322質粒攜帶氨苄青黴素抗性基因和四環素抗性基因,就可以作為篩選的標記基因。一般來說,天然運載體往往不能滿足上述要求,因此需要根據不同的目的和需要,對運載體進行人工改建。現在所使用的質粒載體幾乎都是經過改建的。
Ⅶ 「載體」是什麼意思
載體
開放分類: 生物學、分子生物學、生物工程
英文單詞vector ,在基因工程重組DNA技術中將DNA片段(目的基因)轉移至受體細胞的一種能自我復制的DNA分子。三種最常用的載體是細菌質粒、噬菌體和細菌病毒和動植物病毒。
運載體
在基因操作過程中使用運載體有兩個目的:一是用它作為運載工具,將目的基因轉移到宿主細胞中去;二是利用它在宿主細胞內對目的基因進行大量的復制(稱為克隆)。現在所用的運載體主要有兩類:一類是細菌細胞質的質粒,它是一種相對分子質量較小、獨立於染色體DNA之外的環狀DNA(一般有1~200 kb左右,kb為千鹼基對),有的一個細菌中有一個,有的一個細菌中有多個。質粒能通過細菌間的接合由一個細菌向另一個細菌轉移,可以獨立復制,也可整合到細菌染色體DNA中,隨著染色體DNA的復制而復制。另一類運載體是噬菌體或某些病毒等。現在人們還在不斷尋找新的運載體,如葉綠體或線粒體DNA等也有可能成為運載體。
作為運載體必須具有三個條件
[編輯本段]
:①在宿主細胞中能保存下來並能大量復制;②有多個限制酶切點,而且每種酶的切點最好只有一個,如大腸桿菌pBR322就有多種限制酶的單一識別位點,可適於多種限制酶切割的DNA插入;③有一定的標記基因,便於進行篩選。如大腸桿菌的pBR322質粒攜帶氨苄青黴素抗性基因和四環素抗性基因,就可以作為篩選的標記基因。一般來說,天然運載體往往不能滿足上述要求,因此需要根據不同的目的和需要,對運載體進行人工改建。現在所使用的質粒載體幾乎都是經過改建的。
基因克隆的載體類型:質粒載體,噬菌體載體,柯斯質粒載體,M13噬菌體載體,噬菌粒載體
Ⅷ 基因工程中切割載體和含目的基因的DNA片段是需使用同種限制酶是為什麼是怎麼切割怎麼連的,能不能簡述
所用的同種限制酶是限制性內切酶,也叫做內切酶,至於具體用哪回個內切酶,要根據答你要切的序列進行分析,分析的軟體很多,比如OMIGA,MEGA,primer premier......
至於怎麼切割怎麼連,下面已經說的很清楚了,簡說,就是識別-切割-連接。
基因工程的主要步驟:
1.目的片段的分離與合成,獲得目的片段
2.目的片段與載體連接(載體有兩種,一種叫做克隆載體,為了大量獲得該片段,並對在片段在基因層面進行研究;另一種叫做表達載體,為了將目的片段翻譯成蛋白,對蛋白進行研究);
3.含有目的片段的載體導入宿主細胞內
4.對宿主進行檢測和篩選,主要檢測是否導入成功,和導入的基因是否你所要的;
Ⅸ 在基因表達構建載體中什麼切割質粒什麼切割目的基因,為什麼
質粒是一個閉合的抄DNA圓圈襲,你得先切開它,把它切成一條線;然後你再從一長串DNA上切下你要的目的片段,用連接酶像膠水一樣,吧質粒的兩端和目的片段的兩端連接起來——又成一個圓圈了,但是這次這個DNA圓圈已經含有你要的片段了.
由於載體質粒只有圓圈狀才有活性,才有用,所以你必須這么做.
Ⅹ 在基因表達構建載體中什麼切割質粒什麼切割目的基因,為什麼
質粒是一個閉合的DNA圓圈,你得先切開它,把它切成一條線;然後你再從一長串專DNA上切下你要的目的片段,屬用連接酶像膠水一樣,吧質粒的兩端和目的片段的兩端連接起來——又成一個圓圈了,但是這次這個DNA圓圈已經含有你要的片段了。
由於載體質粒只有圓圈狀才有活性,才有用,所以你必須這么做。。。