用什麼限制酶切割目的基因
Ⅰ 為什麼要兩種酶才能切割基因(兩端要不同的限制酶),不能是同一種嗎
切割目的基因時同種序列當然可以用同種限制酶切割;但有時也用不同種的限制性酶專割。屬
用不同限制酶切割的目的是:保證目的基因和質粒(運載體)的准確連接,避免無效連接(如:目的基因—目的基因連接物、質粒自身環化等)過多。可以用不同限制酶切割相同序列的原理:
雖然一種限制酶只能識別一種特定的氨基酸序列,但兩種限制酶識別的序列可以相包含,例:酶A識別GGATCC序列,酶B識別GATC序列,則GGATCC序列就可以被兩種限制酶切割。哪裡不明白請追問,滿意請採納,希望對你有幫助~
Ⅱ 為什麼用限制酶切割目的基因時候需要使用兩種以上不同的限制酶進行切割
為了防止目的基抄因和運載體自身環化。為保證目的基因正序插入運載體,防止反向連接。
限制性核酸內切酶是可以識別並附著特定的脫氧核苷酸序列,並對每條鏈中特定部位的兩個脫氧核糖核苷酸之間的磷酸二酯鍵進行切割的一類酶。
(2)用什麼限制酶切割目的基因擴展閱讀:
限製作用實際就是限制酶降解外源DNA ,維護宿主遺傳穩定的保護機制。甲基化是常見的修飾作用,可使腺嘌呤A和胞嘧啶C甲基化而受到保護。通過甲基化作用達到識別自身遺傳物質和外來遺傳物質的目的。
與第一型限制酶類似,同時具有修飾及識別切割的作用。可識別短的不對稱序列,切割位與識別序列約距24-26個鹼基對。
為有效的切割DNA,必須同時考慮DNA甲基化和限制酶對該類型甲基化的敏感性。另外,大部分商業限制酶如今專門用於切割甲基化DNA。
Ⅲ 基因工程用限制酶切割目的基因的原料是什麼
我猜基因文庫,猜的勿噴。
Ⅳ 在什麼情況下,切割目的基因和載體時使用不同種限制酶
如果要獲得互補的缺口用於連接,而載體或目標片段上又有多個酶切位點,如果有同尾酶的話就可以使用。一般情況下切割載體和目的基因需要使用相同的酶,偶爾也會使用不同的同尾酶。
Ⅳ 選用限制酶切割目的基因時,只要目的基因兩端的序列中含有該酶的識別序列即可
(1)限制酶Ⅱ限制酶Ⅰ (2)物質循環再生原理、系統學與工程學原理、整體性原理、協調與平衡原理 植被的恢復
Ⅵ 基因工程操作中,用的三個限制酶(一個切割質粒,兩個切割目的基因)都可以不同嗎,也就是可以是三種嗎
標題的理解不來對。
限制自酶切基因的目的是為了露出相匹配的單鏈末端,即切割後目的基因的一個末端會和質粒的末端相匹配,就可以連起來,而為了獲得相匹配的末端則需要同一種限制酶。
所以,如果用一個限制酶切質粒的話,目的基因的兩端都要和質粒末端相匹配,切目的基因的限制酶也是那一個,就是一種限制酶。
如果用兩個限制酶切質粒的話,目的片段的兩端分別是2種相匹配的,需要用2種限制酶切。就是總共2種限制酶。不存在標題的情況。
Ⅶ 基因工程中,需使用特定的限制酶切割目的基因和質粒,便於重組和篩選。已知限制酶I的識別序列和切點是--G
好吧 之前弄來錯了 一般情況下,要把源目的基因連接,需要用同一種或同兩種限制性內切酶酶切質粒和目的基因。在本題中,酶II的識別序列是酶I識別序列的一部分,如果質粒用酶II處理,那麼在geneI和II區都會被切斷,質粒變成了兩段線性序列。所以質粒只能由酶I酶切。
如果目的基因用酶I處理,那麼目的基因與質粒只有一段能夠相連(目的基因的左邊被酶I切割形成粘性末端,質粒gene I區被酶I切割成粘性末端。但是目的基因的右端不能被酶切,所以不能與質粒相連)。
用酶I切割質粒後,gene II區形成兩個粘性末端(GATC);用酶II切割目的基因後,兩段形成的粘性末端均為GATC。兩者可以連接,形成閉合環狀。
Ⅷ 限制酶怎麼切割目的基因圖解
因為要獲得一個目的基因,需將此目的基因兩邊多餘的脫氧核苷酸切除掉,因此有兩個切口,又DNA分子是雙鏈的,所以有4個磷酸二酯鍵被切.
Ⅸ 為什麼用兩種限制酶切有兩種不同的目的基因(產生兩種
為什麼用兩復種限制酶切有兩種不同的目制的基因
用A、B兩種酶切出目的基因來,可以防止自環。然後再用A、B酶去切質粒,也可防自環,且得到與目的基因互補的黏性末端,才能連接目的基因。所以,既要用兩種不同酶切,還要保證質粒和目的基因一樣的兩種酶。兩種不同的限制性內切酶識別並切割的序列是不同的,也就是兩種酶分別切割了基因和載體時,產生了兩個切口,這兩個切口不是粘性末端,不能互補配對,所以不可能連接在一起,如果用一種酶來切那麼這樣基因中或者是載體上就會有相同的粘性末端,這樣基因本身除了切下來的那段之外,剩下的部分在連接酶作用下相同的粘性末端就會配對連接,同樣載體也會繼續連接成環,基因和載體連在一一起也有,而且首尾的順序也有兩種,連接體系跑電泳結果會有4個條帶,至少是4種,而且就算那個連接後的片段大小符合你要求的那段純化後也有一部分是不能表達的.哪四種就不用寫了,你肯定知道的,不能表達的那部分就是順序不對的,這就是同種酶切連接的缺陷性.
Ⅹ 為何通常用兩種限制酶同時切割目的基因和運載體
兩種不同復的限制性內切酶制識別並切割的序列是不同的,也就是兩種酶分別切割了基因和載體時,產生了兩個切口,這兩個切口不是粘性末端,不能互補配對,所以不可能連接在一起,如果用一種酶來切那麼這樣基因中或者是載體上就會有相同的粘性末端,這樣基因本身除了切下來的那段之外,剩下的部分在連接酶作用下相同的粘性末端就會配對連接,同樣載體也會繼續連接成環,基因和載體連在一一起也有,而且首尾的順序也有兩種,連接體系跑電泳結果會有4個條帶,至少是4種,而且就算那個連接後的片段大小符合你要求的那段純化後也有一部分是不能表達的.哪四種就不用寫了,你肯定知道的,不能表達的那部分就是順序不對的,這就是同種酶切連接的缺陷性.