Ecorl切割位點是什麼

Ⅰ 為什麼環狀DNA被一個限制酶酶切只得到

Kpnl單獨酶切得到1000by的DNA分子，要推測DNA分子為環狀，同時也可知，DNA分子中只有一個回Kpnl切割位點．AB選項是鏈狀結構答，排除，D中有兩個Kpnl切割位點，排除，C只有一個切割位點，且用限制性核酸內切酶Eco RI酶切後得到的DNA分子是200by和800by兩種長度的DNA分子，用EcoRⅠ，Kpnl同時酶切後得到200by和400by兩種長度的DNA分子，符合題意．故選：C．

Ⅱ 我想知道用ecorl霉切出後不是差不多把dna切成了兩段嗎，它是如何與運載體結合的啊

運載體唄同樣的酶進行切割，形成相同的粘性末端，再通過鹼基互補配對就可以粘上了

Ⅲ 限制性內切酶有幾類各有什麼特點

根據限制酶的結構，輔因子的需求切位與作用方式，可將限制酶分為三種類型，分別是第一型（Type I）、第二型（Type Ⅱ）及第三型（Type Ⅲ）。

第一型限制酶

同時具有修飾（modification）及識別切割（restriction）的作用；另有識別（recognize)DNA上特定鹼基序列的能力，通常其切割位（cleavage site）距離識別位（recognition site）可達數千個鹼基之遠。例如：EcoB、EcoK。

第二型限制酶

只具有識別切割的作用，修飾作用由其他酶進行。所識別的位置多為短的迴文序列（palindrome sequence）；所剪切的鹼基序列通常即為所識別的序列。是遺傳工程上，實用性較高的限制酶種類。例如：EcoRI、HindⅢ。

第三型限制酶

與第一型限制酶類似，同時具有修飾及識別切割的作用。可識別短的不對稱序列，切割位與識別序列約距24-26個鹼基對。例如：HinfⅢ。

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限制性內切酶分類性質

根據酶的功能特性、大小及反應時所需的輔助因子，限制性內切酶可分為兩大類，即I類酶和Ⅱ酶。最早從大腸桿菌中發現的EcoK、EcoB就屬於I類酶。其分子量較大；反應過程中除需Mg2+外，還需要S-腺苷-L甲硫氨酸、ATP；在DNA分子上沒有特異性的酶解片斷，這是I、Ⅱ類酶之間最明顯的差異。

因此，I類酶作為DNA的分析工具價值不大。Ⅱ類酶有EcoR I、BamH I、Hind Ⅱ、Hind Ⅲ等。其分子量小於105道爾頓；反應只需Mg2+；最重要的是在所識別的特定鹼基順序上有特異性的切點，因而DNA分子經過Ⅱ類酶作用後，可產生特異性的酶解片斷，這些片斷可用凝膠電泳法進行分離、鑒別。

限制性內切酶識別DNA序列中的迴文序列。有些酶的切割位點在迴文的一側（如EcoR I、BamH I、Hind等），因而可形成粘性末端，另一些Ⅱ類酶如Alu I、BsuR I、Bal I、Hal Ⅲ、HPa I、Sma I等，切割位點在迴文序列中間，形成平整末端。

Ⅳ 現有一長度為1000鹼基對的DNA分子,用限制內切核酸內切酶ECORL酶切後得到的DNA分子仍是1000bp

1-200-ECOR1-200-400-KPN1-400-1000-KPN1-1
不知道你能不能看懂。。。這個DNA分子是環狀的

Ⅳ EcoRL是什麼

我估計應該是 ECOR I 這是一種常見的限制性核酸內切酶，能夠識別並切割特定的DNA序列。

Ⅵ 限制性核酸內切酶的切割位點和識別位點的區別

1、位置：

一條單鏈DNA上可能有多個識別位點，但一個識別位點只有一個酶切位點。

2、對稱性：

限制酶的識別位點大多數為迴文對稱結構，切割位點在 DNA 兩條鏈一定是相對稱的位置。

3、識別鹼基個數：

限制酶識別位點的長度一般為 4-8 個鹼基，切割位點只是識別兩個鹼基

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1、限制性核酸內切酶三種類型:

（1）第一型限制酶：

同時具有修飾及識別切割的作用；另有識別DNA上特定鹼基序列的能力，通常其切割位距離識別位可達數千個鹼基之遠。例如：EcoB、EcoK。

（2）第二型限制酶：

只具有識別切割的作用，修飾作用由其他酶進行。所識別的位置多為短的迴文序列；所剪切的鹼基序列通常即為所識別的序列。是遺傳工程上，實用性較高的限制酶種類。例如：EcoRI、HindⅢ。

（3）第三型限制酶：

與第一型限制酶類似，同時具有修飾及識別切割的作用。可識別短的不對稱序列，切割位與識別序列約距24-26個鹼基對。例如：HinfⅢ。

2、限制性核酸內切酶生理意義：

（1）實際就是限制酶降解外源DNA，維護宿主遺傳穩定的保護機制。

（2）甲基化是常見的修飾作用，可使腺嘌呤A和胞嘧啶C甲基化而受到保護。通過甲基化作用達到識別自身遺傳物質和外來遺傳物質的目的。

（3）能產生防禦病毒侵染的限制酶的細菌，其自身的基因組中可能有該酶識別的序列，只是該識別序列或酶切位點被甲基化了。

（4）不是說一旦甲基化了，所有限制酶都不能切割。大多數限制酶對DNA甲基化敏感，因此當限制酶目標序列與甲基化位點重疊時，對酶切的影響有3種可能，即不影響、部分影響、完全阻止。

（5）對甲基化DNA的切割能力是限制酶內在和不可預測的特性，因此，為有效的切割DNA，必須同時考慮DNA甲基化和限制酶對該類型甲基化的敏感性。

（6）另外，大部分商業限制酶如今專門用於切割甲基化DNA。

Ⅶ 實驗設計：消除環狀DNA載體上的酶切位點

環狀DNA載體，那就是質粒，或者粘粒什麼的了。。

如果購買的是商業用載體的話，如果是多酶切位點那段的酶切位點去掉是不會不會使目的基因所表達的蛋白質失活的，但是如果是不在多酶切位點的話，就可能使其它的「框架」受到影響，比如amp抗性或者clo抗性的失效（致命影響後期篩選）等。

如果是多酶切位點的話，此區域的酶切位點不可能通過雙酶切去掉，所以建議設計合理的pcr引物進行此敲基因操作，這個跟進行定點突變的原理差不多，所以只要設計一個引物就可以了，但是該試劑盒價格比較貴，在兩萬左右（20次反應），外加引物設計及後期測序要￥2500左右。

原理：
其實就是PCR反應原理：
DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動子的參與下，根據鹼基互補配對原則復製成同樣的兩分子挎貝。在實驗中發現，DNA在高溫時也可以發生變性解鏈，當溫度降低後又可以復性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復性，並設計引物做啟動子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。通過設計特定的引物來達到改變基因的效果。

http://ke..com/lemma-php/dispose/view.php/2764.htm
http://ke..com/lemma-php/dispose/view.php/274624.htm

具體的說明電郵本人郵箱給你一份說明書吧。

實驗器材：
PCR儀（用於pcr反應）、水浴鍋（消化未突變質粒DNA）、菌種培養系列設備及實驗耗材、試劑。

步驟：

設計引物——》交於生化公司合成引物——》PCR——》消化未突變DNA——》選擇宿主菌——》高效感受態制備或購買——》轉化——》amp或其它抗性平板塗布——》培養——》單菌落質粒提取——》篩選——》測序確認——》得到目的DNA。

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如果樓主想進一步了解的話可以通過郵箱跟我進行交流。

Ⅷ 核酸內切酶與外切酶具體有那些區別

它們都是核酸酶，但是它們切核酸的方式不同。具體不同的地方在於：

1、水解位置不同；

2、切點要求不同；

3、分類不同。

從多核苷酸鏈末端水解核酸的酶稱為核酸外核酶，而從多核苷酸鏈中部水解核酸的酶稱為核酸內核酶，兩者都是核酸酶，但它們切割核酸的方式不同。

核酸內切酶:

核酸內切酶是在核酸水解酶中，水解DNA分子鏈內部磷酸二酯鍵生成寡/寡聚核苷酸的酶。從對底物的特異性來看，可分為DNaseⅠ、DNaseⅡ等僅分解DNA的酶。

脾臟RNase、RNaseT1等僅分解RNA的酶；還有就是如鏈孢霉（Neurospora）核酸酶這類既分解DNA又分解RNA的酶。

一般來說，大都不具鹼基特異性，但也有諸如HindⅢ、EcoRⅠ等具有限制性的，能夠識別並切斷特定的鹼基或鹼基序列的酶。

核酸外切酶:

核酸外切酶是一類能從多核苷酸鏈的一端開始按序催化水解3、5-磷酸二酯鍵，降解核苷酸的酶。其水解的最終產物是單個的核苷酸（DNA為dNTP，RNA為NTP）。按作用的特性差異可以將其分為單鏈的核酸外切酶和雙鏈的核酸外切酶。

單鏈的核酸外切酶包括大腸桿菌核酸外切酶Ⅰ（exoⅠ）和核酸外切酶Ⅶ（exoⅦ）。核酸外切酶Ⅶ（exoⅦ）能夠從5′-末端或3′-末端呈單鏈狀態的DNA分子上降解DNA，產生出寡核苷酸短片段，而且是唯一不需要Mg2+離子的活性酶，是一種耐受性很強的核酸酶。

核酸外切酶Ⅶ（exoⅦ）可以用來測定基因組DNA中一些特殊的間隔序列和編碼序列的位置。它只切割末端有單鏈突出的DNA分子。

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核酸內切酶（endonuclease）在核酸水解酶中，為可水解分子鏈內部磷酸二酯鍵生成寡核苷酸的酶，與核酸外切酶相對應。

從對底物的特異性來看，可分為DNaseⅠ、DNaseⅡ等分解DNA的酶；RNase、RNaseT1等分解RNA的酶。一般來說，大都不具鹼基特異性，但也有諸如脾臟RNase、RNaseT1等或限制性內切酶那種能夠識別並切斷特定的鹼基或鹼基序列的酶。

參考資料：網路-外切酶

網路-核酸內切酶

Ⅸ 限制性內切酶有哪些特點

在20世紀60年代，人們就注意到DNA在感染宿主後會被降解的現象，從而提出限制性內切酶的概念。

1968年，首次從emphasis：role=italicE.coli：emphasisK中分離到限制性內切酶，它有特定的識別位點但沒有特定的切割位點，其中切割位點離識別位點達1000bp以上。1970年，美國約翰·霍布金斯大學的Smith偶然發現，流感嗜血桿菌（emphasis：role=italicHaemophilus：influenzaeemphasis）能迅速降解外源的噬菌體DNA，其細胞提取液可降解emphasis：role=italicE.coli：emphasisDNA，但不能降解自身DNA，從而找到emphasis：role=italicHinemphasisdⅡ限制性內切酶。

emphasis：role=italicHinemphasisdⅡ限制性內切酶位點和切割位點如下：：role=center5′-GTTC↓AGAC-3′：role=center3′-CAAG↑TCTG-5′從此以後，發現的限制性內切酶越來越多，並且許多已經在實踐中得到應用。emphasis：role=italicEcoemphasisRI是應用最廣泛的限制性內切酶，切割位點如下：：role=center5′G↓AATTC3′：role=center3′CTTAA↑G5′限制性內切酶的命名遵循一定的原則，主要依據來源而定，涉及宿主的種名、菌株號或生物型。

命名時，依次取宿主屬名第一字母，種名頭兩個字母，菌株號，然後再加上序號（羅馬數字）。如emphasis：role=italicHinemphasisd：Ⅲ限制性內切酶，emphasis：role=italicHinemphasis指來源於流感嗜血桿菌，d表示來自菌株Rd，Ⅲ表示序號。以前在限制性內切酶和修飾酶前加R或M，且菌株號和序號小寫，但現在限制性內切酶名稱中的R省略不寫。1986年下半年發現615種限制酶和98種甲基化酶；1998年發現10000種細菌或古細菌中存在3000種酶，且有200多種特異性。到2005年1月，共發現4342種限制酶和甲基化酶，其中限制酶有3681種，包括I型、Ⅱ型、Ⅲ型限制酶各有59、3612、10種。I類限制性核酸內切酶：由3種不同亞基構成，兼具有修飾酶活性和依賴於ATP的限制性內切酶活性，它能識別和結合於特定的DNA序列位點，隨機切斷在識別位點以外的DNA序列，這類酶的作用需要Mgsuperscript2+superscript、S腺苷甲硫氨酸及ATP等的參與。

Ⅲ型限制與修飾系統的酶種類更少，所佔比例不到1%，如emphasis：role=italicEcoemphasisP1和emphasis：role=italicEcoemphasisP15，它們的識別位點分別是AGACC和CAGCAG，切割位點則在下游2426bp處。在基因操作中，一般所說的限制酶或修飾酶，除非特指，均指Ⅱ型限制性核酸內切酶類。與I型限制性核酸內切酶相比，Ⅱ型限制性核酸內切酶的特點是其切割位點靠近識別序列，切割產生具有黏性末端或平末端的DNA片段。其基本特性為：在DNA分子雙鏈的特異性識別部位，切割DNA分子產生鏈的斷裂；2個單鏈斷裂部位在DNA分子上的分布通常不是彼此相對的；斷裂形成的DNA片段往往具有互補的單鏈延伸末端。