切割dna用什麼酶

① 限制性內切酶如何切割，外源DNA怎麼連上去

這一過程需藉助兩種酶：限制性核酸內切酶和DNA連接酶。

限制性核酸內專切酶是可以識別特定的脫屬氧核苷酸序列，並在每條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵進行切割的一類酶，簡稱限制酶。

DNA連接酶利用NAD或ATP中的能量催化兩個核酸鏈之間形成磷酸二酯鍵。反應過程可分三步：

(1)NAD+或ATP將其腺苷醯基轉移到DNA連接酶的一個賴氨酸殘基的ε─氨基上形成共價的酶-腺苷酸中間物，同時釋放出煙醯胺單核苷酸(NMN)或焦磷酸。

(2)將酶-腺苷酸中間物上的腺苷醯基再轉移到DNA的5'-磷酸基端，形成一個焦磷醯衍生物，即DNA-腺苷酸;

(3)這個被激活的5'-磷醯基端可以和DNA的3'-OH端反應合成磷酸二酯鍵，同時釋放出AMP。

② 有關DNA的幾種酶

DNA限制性內切酶能特異地結合於一段被稱為限制性酶識別序列的DNA序列之內或其附近的特異位點上,並切割雙鏈DNA。它可分為三類:Ⅰ類和Ⅲ類酶在同一蛋白質分子中兼有切割和修飾(甲基化)作用且依賴於ATP的存在。Ⅰ類酶結合於識別位點並隨機的切割識別位點不遠處的DNA，而Ⅲ類酶在識別位點上切割DNA分子,然後從底物上解離。Ⅱ類由兩種酶組成: 一種為限制性內切核酸酶(限制酶),它切割某一特異的核苷酸序列; 另一種為獨立的甲基化酶,它修飾同一識別序列。Ⅱ類中的限制性內切酶在分子克隆中得到了廣泛應用，它們是重組DNA的基礎。絕大多數Ⅱ類限制酶識別長度為4至6個核苷酸的迴文對稱特異核苷酸序列(如EcoRⅠ識別六個核苷酸序列:5'- G↓AATTC-3'),有少數酶識別更長的序列或簡並序列。Ⅱ類酶切割位點在識別序列中,有的在對稱軸處切割,產生平末端的DNA片段(如SmaⅠ:5'-CCC↓GGG-3');有的切割位點在對稱軸一側,產生帶有單鏈突出末端的DNA片段稱粘性未端, 如EcoRⅠ切割識別序列後產生兩個互補的粘性末端。

DNA外切酶是一類能從多核苷酸鏈的一端開始按序催化水解3、5-磷酸二酯鍵，降解核苷酸的酶。其水解的最終產物是單個的核苷酸（DNA為dNTP，RNA為NTP）。按作用的特性差異可以將其分為單鏈的核酸外切酶和雙鏈的核酸外切酶。

DNA聚合酶 , 以DNA為復制模板，從將DNA由5'端點開始復制到3'端的酶。
DNA聚合酶的主要活性是催化DNA的合成（在具備模板、引物、dNTP等的情況下）及其相輔的活性。
真核細胞有5種DNA聚合酶，分別為DNA聚合酶α（定位於胞核，參與復制引發具5－3外切酶活性），β（定位於核內，參與修復，具5－3外切酶活性），γ（定位於線粒體，參與線粒體復制具5－3和3－5外切活性），δ（定位核，參與復制，具有3－5和5－3外切活性），ε（定位於核，參與損傷修復，具有3－5和5－3外切活性）。
原核細胞有3種DNA聚合酶，都與DNA鏈的延長有關。DNA聚合酶I是單鏈多肽，可催化單鏈或雙鏈DNA 的延長；DNA聚合酶II則與低分子脫氧核苷酸鏈的延長有關；DNA聚合酶III在細胞中存在的數目不多，是促進DNA鏈延長的主要酶。

DNA連接酶是1967年在三個實驗室同時發現的，最初是在大腸桿菌細胞中發現的。它是一種封閉DNA鏈上缺口酶，藉助ATP或NAD水解提供的能量催化DNA鏈的5'-PO4與另一DNA鏈的3'-OH生成磷酸二酯鍵。但這兩條鏈必須是與同一條互補鏈配對結合的(T4DNA連接酶除外)，而且必須是兩條緊鄰DNA鏈才能被DNA連接酶催化成磷酸二酯鍵。

③ DNA重組技術，使用限制酶切割DNA時，為什麼不需要解旋酶

1.在DNA重組技術中，需要將目的基因和質粒載體連接起來。因此，需要切割含目的基版因的DNA分子和質粒載體，使權磷酸二酯鍵斷裂，再用DNA連接酶將它們連接起來。
2.限制酶能夠識別特定的脫氧核苷酸序列，並在特定的位點切割DNA分子，使磷酸二酯鍵斷裂。而解旋酶作用於兩條DNA鏈間的氫鍵，使氫鍵斷裂，DNA解旋，形成單鏈。
3.綜上所述，DNA重組技術，使用限制酶切割DNA時，不需要解旋酶。

④ 限制酶切割目的基因和載體用同一種酶，但是目的基因切兩個割下來 ，載體只切一刀，怎麼用同種酶

限制酶切割目的基因和載體用同一種酶，但是目的基因切兩個割下來 ，載體只切一刀，怎麼用同種酶？？？
分子生物學 生物化學 微生物 脫氧核糖核酸（DNA） 生

⑤ 基因工程中主要的工具酶有哪幾種，它們的作用是什麼

基因工程工具酶主要包括限制酶、聚合酶、連接酶、修飾酶和核酸酶五大類，具體解釋如下：

1、DNA限制性內切酶

生物體內能識別並切割特異的雙鏈DNA序列的一種內切核酸酶。它是可以將外來的DNA切斷的酶，即能夠限制異源DNA的侵入並使之失去活力，但對自己的DNA卻無損害作用，這樣可以保護細胞原有的遺傳信息；

2、連接酶

它是一種封閉DNA鏈上缺口酶，藉助ATP或NAD水解提供的能量催化DNA鏈的5'-PO4與另一DNA鏈的3'-OH生成磷酸二酯鍵；

3、聚合酶

系專司生物催化合成脫氧核糖核酸和核糖核酸的一類酶的統稱；

4、核酸酶

核酸酶有DNase、RNase、核酸酶S1等，可水解相應的DNA和RNA，核酸酶S1可降解單鏈DNA和RNA，用量增大也可降解雙鏈核酸，它可用於切去ds-cDNA合成中產生的發夾環；

5、修飾酶

體內有些酶可在其他酶的作用下，將酶的結構進行共價修飾，使該酶活性發生改變，這種調節稱為共價修飾調節。

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工具酶的相關應用——多重放大技術：

為了獲得更高的檢測靈敏度，將多種信號放大技術結合起來使用是一種有效途徑。基於切刻內切酶與DNA聚合酶組合作用的等溫循環鏈置換放大技術，是近年來被廣泛使用的一種工具酶組合信號放大技術。

該技術的基本原理是：通過鹼基的互補配對雜交形成切刻內切酶的識別位點後，切刻內切酶在該位點對其中的一條核酸鏈進行切刻作用產生3′端為羥基的切口。

聚合酶識別該切口的3′端，以未切割的序列為模板，沿著3′到5′的方向復制聚合置換被切割鏈的另一段序列，最後形成一條完整的雙鏈結構。形成的雙鏈DNA再次被切刻內切酶識別剪切，啟動聚合酶反應。

參考資料來源：網路-工具酶

⑥ 最好用哪種酶切割質粒，用哪種酶切割目的基因所在DNA

兩種酶同時處理 這樣不會出現三種產物 不會環化 容易得到產物 避免篩選與檢測

⑦ 兩種酶怎麼切割DNA請畫圖，還有目的基因的切割

這是高中生物選修階段的內容，DNA有鏈裝和環裝兩種，兩種酶的切割位點未知，目的回基因也不知道是答處於哪個位置，建議給出具體的題目來更好的解答。
如果要獲取目的基因，那兩種酶不能破壞他，然後用兩種酶可以防止自身環化

⑧ 基因剪刀是什麼酶

考點復： 基因工程的原理及技術 專題：制 分析： 基因工程中要對目的基因進行切割、改造、修飾和拼接，然後導入受體細胞，使重組DNA分子在細胞中表達．要實現這一精確的操作過程至少需要三種工具：准確切割DNA的「手術刀」--限制性核酸內切酶，將DNA片段連接起來的「縫合針」--DNA連接酶，將體外重組好的DNA導入受體細胞的「運輸工具」--基因的載體． A、DNA連接酶能夠將限制酶切割的末端連接，是基因工程的「縫合針」，A錯誤；B、DNA聚合酶一般用於合成DNA，不屬於基因工程的操作工具，B錯誤；C、蛋白質水解酶用於水解蛋白質，不屬於基因工程的操作工具，C錯誤；D、限制性核酸內切酶內特異性識別特定的核苷酸系列，在基因工程能夠在特定的核苷酸序列出切割質粒和目的基因，故稱為基因工程的「剪刀」，D正確．故選：D． 點評： 本題考查基因工程相關知識，考生要能夠識記基因工程三種工具的作用，能夠根據作用的特點對應「手術刀」、「縫合針」和「運輸工具」，屬於簡單題．

⑨ 切割DNA用什麼酶比較好

限制性核酸內切酶

⑩ dna分子經限制酶切割產生的dna片段末端通常用的兩種方式是哪兩種

簡單來說，限制性內切酶識別DNA序列中的迴文序列。有些酶的切割位點在迴文版的一側（如EcoR I、BamH I、Hind等）權，因而可形成粘性末端，另一些Ⅱ類酶如Alu I、BsuR I、Bal I、Hal Ⅲ、HPa I、Sma I等，切割位點在迴文序列中間，形成平整末端。