不同酶切位點用什麼酶來切割
1. 平末端酶切位點有哪些怎樣判斷酶切位點是粘性末端還是平末端
怎樣判斷酶切位點是粘性末端還是平末端
用限制酶切割後得到的末端齊平就專是平末端,一長一短就是粘屬性末端
根據限制性內切酶切割DNA所產生的產物末端,發現限制性內切酶對DNA的切割有兩種方式,即平切和交錯切.所謂平切,就是限制性內切酶在DNA雙鏈的相同位置切割DNA分子,這樣產生的末端就是平末端.交錯切就是限制性內切酶在DNA雙鏈的不同位置切割DNA,產生的DNA片段的末端不是平齊的
2. 下表中列出了幾種限制酶識別序列及其切割位點,圖1、圖2中箭頭表示相關限制酶的酶切位點.請回答下列問題
(1)由圖可知,質粒是環狀的,切割前沒有游離的磷酸基團,質粒中有一個SmaⅠ酶切割位點,所以切割後有兩個游離的磷酸基團.
(2)DNA分子中C與G之間有三個氫鍵,A與T之間有兩個氫鍵,所以C與G含量越多,熱穩定性越高,由圖可知,SmaⅠ酶切位點的配對方式是C與G配對.
(3)由圖可知,目的基因和標記基因中都有SmaⅠ酶切割序列,如用SmaⅠ酶會破壞目的基因和標記基因.
(4)如只使用EcoRⅠ酶切割,會形成相同的黏性末端,可能出現質粒和含目的基因的外源DNA片段自身環化.
(5)DNA連接酶可將目的基因與質粒連接起來形成重組DNA.
(6)重組質粒中抗生素抗性基因是標記基因,作用是為了鑒別和篩選含有目的基因的細胞.
(7)大腸桿菌喪失吸收蔗糖能力,導入蔗糖轉運蛋白基因後可恢復吸收蔗糖能力,所以在以蔗糖為唯一含碳營養物質的培養基中培養,可篩選出需要的表達成功的大腸桿菌.
(8)制備cDNA探針時,需提取、分離mRNA作用為模板,在逆轉錄酶的催化下合成cDNA探針.
(9)基因工程中,切割含有目的基因的DNA片段和載體時用同種限制酶.並用顯微注射法導入受精卵中,再利用SRY探針 (Y染色體上的性別決定基因)進行檢測,將檢測反應呈陰性的胚胎進行移植培養.
故答案為:
(1)0、2
(2)高
(3)SmaⅠ會破壞質粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因
(4)質粒和含目的基因的外源DNA片段自身環化
(5)DNA連接
(6)鑒別和篩選含有目的基因的細胞
(7)蔗糖為唯一含碳營養物質
(8)mRNA 逆轉錄酶
(9)同種限制酶 顯微注射 受精卵 陰性
3. 相同的識別序列不同的酶切位點
選擇的限制酶應在目的基因兩端存在識別位點,但BamHⅠ可能使質粒中的啟動子丟失,因此只能選BclI和HindⅢ兩種限制酶切割.
故選:B.
4. 下表中列出了幾種限制酶識別序列及其切割位點,圖l、圖2中箭頭表示相關限制酶的酶切位點.請回答下列問題
(1)質粒是環狀DNA分子,不含游離的磷酸基團;外源DNA分子的每一條鏈都含有一個游離的磷酸基團,因此共含有2個游離的磷酸基團.
(2)DNA分子中,C與G之間有三個氫鍵,A與T之間有兩個氫鍵,所以C與G含量越多,DNA分子的熱穩定性越高.由表中信息可知,SmaⅠ的識別序列為CCCGGG,酶切位點在C與G之間,因此插入的SmaⅠ酶切位點越多,質粒的熱穩定性將越高.
(3)用SmaⅠ酶切割外源DNA和質粒時,會導致目的基因與抗性基因被破壞,因此不能用SmaⅠ構建重組質粒.
(4)BamHⅠ和HinRⅢ兩種限制酶切割產生的黏性末端不同,若用這兩種限制酶同時處理外源DNA和質粒,再用DNA連接酶連接兩者時,可避免切割的外源DNA、質粒的粘性末端自身環化.
(5)將切割後的質粒與目的基因片段混合,並加入DNA連接酶.
(6)重組質粒中抗生素基因的作用是鑒別和篩選含有目的基因的細胞.
故答案為:
(1)0、2
(2)高
(3)SmaⅠ
(4)BamHⅠ、HindⅢ
(5)DNA連接
(6)鑒別和篩選含有目的基因的細胞
5. 不同種類的限制酶切割位點一定不同嗎相同的黏性末端一定是由相同的限制酶切出的嗎關於這一塊麻煩詳細
一種限制酶可能可以識別多種酶切位點,所以有可能不同酶切出的末端是相同的。具體是哪些酶我忘了,去年做題的時候見到過
6. 如何給一段序列增加一個酶切位點。
你可以設計帶有酶切位點的引物,對目的基因進行PCR,就可在目的基因上引入酶切位版點。
步驟:引物設權計(藉助軟體)——合成引物(公司合成)——PCR。
最重要的一個儀器就是PCR儀了,具體的加什麼試劑,加多少,我想樓主應該是做分子生物學,這些應該挺清楚的了。
樓主,引物一般是用軟體設計,例如Primer.5,你根據你的目的基因兩端的特點,設計合適的引物,然後在引物上再添加酶切位點 ,例如EcoRⅠ 是應用最廣泛的限制性內切酶,酶切位點和切割位點如下: 5' G↓AATTC 3' 3' CTTAA↑G 5' ,你就可以在這兩條引物上分別添加這幾個脫氧核苷酸,這不就在引物中引入酶切位點了嗎?經過PCR後引物和目的基因連在一起,酶切位點自然也連上去了。樓主,你可以根據需要,引入不同的限制性內切酶的酶切位點。
7. 兩種不同的DNA限制酶切割為何會形成相同的黏性末端如何判斷兩種限制酶切割是否會形成相同的黏性末端
識別的位點相同就可以了,而產生相同的鹼基序列就是判斷是否能形成粘性末端的依據