小鼠腹水制備需要哪些儀器

⑴ 小鼠腹水做westren-blot的稀釋比例是多少

在測定血樣時，首先應去除蛋白質。去除蛋白質可使結合型的葯物均出來，以便測定專葯物的總濃度；屬去除蛋白質也可預防提取過程中蛋白質發泡，減少乳化的形成，以及可以保護儀器性能（如保護HPLC柱不被沾污），延長使用期限。去除蛋白法有以下幾種。
1.加入與水相混溶的有機溶劑加入水溶性的有機溶劑；可使蛋白質的分子內及分子間的氫鍵發生變化而使蛋白質凝聚，使與蛋白質結合的葯物釋放出來。
2.加入中性鹽加入中性鹽，使溶液的離子強度發生變化。中性鹽能將與蛋白質水合的水置換出來，從而使蛋白質脫水而沉澱。

⑵ 雜交瘤制備小鼠腹水抗體問題求助

A、制備單抄克隆抗體時，需要給小鼠注射特定抗原，再從小鼠脾臟中獲取已經免疫的B淋巴細胞，故A正確；
B、採用一定的技術將B細胞與骨髓瘤細胞融合獲得雜交瘤細胞，故B錯誤；
C、誘導細胞融合後，除了產生雜交瘤細胞，還會產生B淋巴細胞自身融合的細胞、骨髓瘤細胞自身融合的細胞等，因此需要用選擇培養基篩選出雜交瘤細胞，故C正確；
D、篩選出能產生特異性抗體的雜交瘤細胞後，還需克隆化培養，有兩種方法，即培養基中培養和注入小鼠腹腔中培養，最後從培養液或小鼠腹水中獲取單克隆抗體，故D正確．

⑶ 制備單克隆抗體時注入小鼠腹腔比用培養液培養有何優點

單克隆抗體制備有兩種方法。

第一種方法是：增量培養版法，即將雜交瘤細胞在體外權培養，在培養液中分離單克隆抗體。該法需用特殊的儀器設備，一般應用無血清培養基，以利於單克隆抗體的濃縮和純化。

第二種也是最普遍採用的方法是小鼠腹腔接種法。選用BALB/c小鼠或其親代小鼠，先用降植烷或液體石蠟行小鼠腹腔注射，一周後將雜交瘤細胞接種到小鼠腹腔中去。通常在接種一周後即有明顯的腹水產生，每隻小鼠可收集5～10ml的腹水，有時甚至超過40ml。該法制備的腹水抗體含量高，每毫升可達數毫克甚至數十毫克水平。此外，腹水中的雜蛋白也較少，便於抗體的純化。接種細胞的數量應適當，一般為500000/鼠，可根據腹水生長情況適當增減。

⑷ 單克隆抗體的制備過程

過程
1）免疫脾細胞的制備 制備單克隆抗體的動物多採用純系 Balb/c小鼠。免疫的方法取決於所用抗原的性質。免疫方法同一般血清的制備，也可採用脾內直接免疫法。
2）骨髓瘤細胞的培養與篩選 在融合前，骨髓瘤細胞應經過含8-AG的培養基篩選，防止細胞發生突變恢復HGPRT的活性（恢復HGPRT的活性的細胞不能在含8-AG的培養基中存活）。骨髓瘤細胞用10%小牛血清的培養液在細胞培養瓶中培養，融合前24h換液一次，使骨髓瘤細胞處於對數生長期。
3）細胞融合的關鍵:
1技術上的誤差常常導致融合的失敗。例如，供者淋巴細胞沒有查到免疫應答。這必然要失敗的。
2融合試驗最大的失敗原因是污染，融合成功的關鍵是提供一個干凈的環境，以及適宜的無菌操作技術。

4）陽性克隆的篩選 應盡早進行。通常在融合後10天作第一次檢測，過早容易出現假陽性。檢測方法應靈敏、准確、而且簡便快速。具體應用的方法應根據抗原的性質，以及所需單克隆抗體的功能進行選擇。常用的方法有 RIA法、 ELISA法和免疫熒光法等。其中ELISA法最簡便，RIA法最准確。陽性克隆的篩選應進行多次，均陽性時才確定為陽性克隆進行擴增。
5）克隆化 克隆化的目的是為了獲得單一細胞系的群體。克隆化應盡早進行並反復篩選。這是因為初期的雜交瘤細胞是不穩定的，有丟失染色體的傾向。反復克隆化後可獲得穩定的雜交瘤細胞株。克隆化的方法很多，而最常用的是有限稀釋法。
（1）顯微操作法：在顯微鏡下取單細胞，然後進行單細胞培養。這種方法操作復雜，效率低，故不常用。
（2）有限稀釋法：將對數生長期的雜交瘤細胞用培養液作一定的稀釋後，按每孔1個細胞接種在培養皿中，細胞增值後成為單克隆細胞系。第一次克隆化時加一定量的飼養細胞。由於第一次克隆化生長的細胞不能保證單克隆化，所以為獲得穩定的單克隆細胞株需經2～3次的再克隆才成。應該注意的是，每次克隆化過程中所有有意義的細胞都應冷凍保存，以便重復檢查，避免丟失有意義的細胞。
（3）軟瓊脂法：將雜交瘤細胞稀釋到一定密度，然後與瓊脂混懸。在瓊脂中的細胞不能自由移動，彼此互不相混，從而達到單細胞培養的目的。但此法不如有限稀釋法好。
（4）熒光激光細胞分類法：用抗原包被的熒光乳膠微球標記雜交瘤細胞，然後根據抗原與雜交瘤細胞結合的特異性選出細胞，並進行單細胞培養。

6）細胞的凍存與復甦
7）大規模單克隆抗體的制備 選出的陽性細胞株應及早進行抗體制備，因為融合細胞隨培養時間延長，發生污染、染包體丟失和細胞死亡的機率增加。抗體制備有兩種方法。一是增量培養法，即將雜交瘤細胞在體外培養，在培養液中分離單克隆抗體。該法需用特殊的儀器設備，一般應用無血清培養基，以利於單克隆抗體的濃縮和純化。最普遍採用的是小鼠腹腔接種法。選用BALB/c小鼠或其親代小鼠，先用降植烷或液體石蠟行小鼠腹腔注射，一周後將雜交瘤細胞接種到小鼠腹腔中去。通常在接種一周後即有明顯的腹水產生，每隻小鼠可收集5～10ml的腹水，有時甚至超過40ml。該法制備的腹水抗體含量高，每毫升可達數毫克甚至數十毫克水平。此外，腹水中的雜蛋白也較少，便於抗體的純化。

⑸ 如何提高單抗小鼠腹水產量

1、單抗的大規模製備
目前大量制備單抗的方法主要有兩大系統，一是動物體內生產法，這是國內外實驗室所廣泛採用；另一是體外培養法。
（1）動物體內生產單抗的方法
迄今為止，通常情況下均採用動物體內生產單抗的方法，鑒於絕大多數動物用雜交瘤均由BALB/c小鼠的骨髓瘤細胞與同品系的脾細胞融合而得，因此使用的動物當然首選BALB/c小鼠。本方法即將雜交瘤細胞接種於小鼠腹腔內，在小鼠腹腔內生長雜交瘤，並產生腹水，因而可得到大量的腹水單抗且抗體濃度很高。可見該法操作簡便、經濟，不過，腹水中常混有小鼠的各種雜蛋白（包括Ig），因此在很多情況下要提純後才能使用，而且還有污染動物病毒的危險，故而最好用SPF級小鼠。
（2）體外培養生產單抗的方法
總體上講，雜交瘤細胞系並不是嚴格的貼壁依賴細胞（anchoragedependentcell，ADC），因此既可以進行單層細胞培養，又可以進行懸浮培養。雜交瘤細胞的單層細胞培養法是各個實驗室最常用的手段，即將雜交瘤細胞加入培養瓶中，以含10-15%小牛血清的培養基培養，細胞濃度以1×106-2×106/ml為佳，然後收集培養上清，其中單抗含量約10-50ug/ml。顯然，這種方法制備的單抗量極為有限，無疑是不適用於單抗的大規模生產。要想在體外大量制備單抗，就必須進行雜交瘤細胞的大量（高密度）培養。單位體積內細胞數量越多，細胞存活時間越長，單抗的濃度就越高，產量就越大。

⑹ 幾種方法純化小鼠腹水IgG2b類單抗的比較

本試驗採用多種蛋白A親和層析法純化小鼠腹水IgG2b類單克隆抗體,以期純化出高純度的IgG2b類單克隆抗體。1材料與方法1.1試驗材料分泌型為IgG2b類鼠抗相思子毒素雜交瘤細胞株由本實驗室保存,常規方法制備腹水,HiTrap rPro-tein A FF預裝柱為Amersham Phamacia公司產品,蛋白檢測試劑盒(BCA Protein Assay Kit)為美國Pierce公司產品,小鼠亞類鑒定試劑盒為Sigma公司產品,電泳槽為美國BIO-RAD公司產品,酶聯免疫檢測儀為美國BIO-RAD550型,其他試劑均為進口分裝或國產分析純化學試劑,試驗用水為超純水或去離子水。1.2腹水的處理方法採用二氧化硅吸附法對腹水進行初步處理。

⑺ 制備小鼠腹水瘤需要先在腹腔內注射石蠟油嗎

石蠟是提前的免疫刺激 到時候能促進腹水產生 減少實體瘤的形成 你要的是實體瘤么？好像加大細胞密度就容易成瘤

⑻ 小鼠腹水是什麼

在大量制備單克隆抗體中，將雜交瘤細胞注入小鼠腹腔讓其大量生產單克隆抗體。

總而言之就是比較粗的單克隆抗體

⑼ 雜交瘤細胞的培養為什麼要在小鼠體內小鼠腹水的主要

小鼠腹水就是小鼠的組織液,含有豐富的營養物質,適合進行動物細胞培養,相當於教材中提到的培養液.

⑽ 小鼠腹水單克隆抗體制備原理

正常小抄鼠用抗原免疫後，脾臟襲的B淋巴細胞(漿細胞)將產生特異性抗體，但這些細胞在體外不能長期存活。為了能使這些細胞在體外長期生存，並利用其產生抗體，可將免疫脾細胞與能無限止地培養、但不分泌抗原的小鼠骨髓瘤細胞進行融合，形成既具有免疫脾細胞分泌特異性抗體的能力，又有使惡性腫瘤細胞迅速無限制繁殖特性的B淋巴細胞雜交瘤，經篩選後克隆化，然後進行大量培養或接種到同系小鼠腹腔內，培養液、腹水或血清中就會產生大量高度的特異性抗體，這就是小鼠單克隆抗體。根據其原理，也可以生產人源單克隆抗體、大鼠單克隆抗體、人一小鼠單克隆抗體等。