測dna和rna濃度儀器有什麼
① 紫外吸收法測定DNA濃度的儀器叫什麼
紫外分光光度計
② DNA、RNA檢測試劑分別是什麼
甲基綠和吡羅紅的混合液
DNA與甲基綠親和力大,被染成綠色
RNA與吡羅紅親和力大,被染成紅色,
③ DNA或RNA樣品不純,用紫外分光光度計測定其濃度和純度的准確性會受到影響,為什麼
分光光度計
分光光度計已經成為現代分子生物實驗室常規儀器。常用於核酸,蛋白定量以及細菌生長濃度的定量。核酸的定量是分光光度計使用頻率最高的功能。可以定量溶於緩沖液的寡核苷酸,單鏈、雙鏈DNA,以及RNA。核酸在波長 260 nm處有最高吸收峰。吸收紫外光的性質是嘌呤環和嘧啶環的共軛雙鍵系統所具有的,所以嘌呤和嘧啶以及一切含有它們的物質,不論是核苷、核苷酸或核酸都有吸收紫外光的特性。但紫外法不能區分DNA和RNA,只能用來鑒定核酸的純度和含量。
蛋白質由於含有芳香氨基酸,因此也能吸收紫外光。通常蛋白質的吸收高峰在280nm波長處,在260nm處的吸收值公為核酸的十分之一或更低,故核酸樣品中蛋白質含量較低時對核酸的紫外測定影響不大。RNA的260nm與280nm吸收的比值在2.0以上;DNA的260nm與280nm吸收的比值則在1.9左右。當樣品中蛋白質含量較高時比值即下降。
分光光度計採用一個可以產生多個波長的光源,通過系列分光裝置,從而產生特定波長的光源,光源透過測試的樣品後,部分光源被吸收,計算樣品的吸光值,從而轉化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。
核酸的定量
DNA和RNA都有吸收紫外光的性質,它們的吸收高峰在260nm波長處,每種核酸的分子構成不一, 因此其換算系數不同。定量不同類型的核酸,事先要選擇對應的系數。如:1OD 的吸光值分別相當於50μg / ml 的dsDNA,37μg / ml 的ssDNA, 40μg/ml的RNA,30μg/ml的寡核苷酸。測試後的吸光值經過上述系數的換算,從而得出相應的樣品濃度,這些由分光光度計內預設的程序執行,因此,測試前選擇正確的程序,測試樣品的類型,首先測試空白液,然後再測試樣品,注意輸入樣品稀釋倍數。
如何避免吸光值漂移
讀數不穩定可能是實驗者最頭痛的問題。靈敏度越高的儀器, 表現出的吸光值漂移越大。事實上,分光光度計的設計原理和工作原理,允許吸光值在一定范圍內變化,即儀器有一定的准確度和精確度。
核酸本身物化性質
溶解核酸的緩沖液的pH 值、離子濃度等
在測試時,離子濃度太高也會導致讀數漂移,因此建議使用pH 值一定、離子濃度較低的緩沖液(如TE)可大大穩定讀數。核酸的吸光值受pH值和緩沖液離子濃度影響。只有在一定的pH值和低離子濃度的條件下(如10 mM Tris-HCl pH 8.0),才能得到精確的檢測結果。水的pH值不穩定,可能導致檢測誤差。一些緩沖液在紫外范圍內存在自身吸收,為了確保准確測量,請使用與懸浮或洗脫樣品時相同的緩沖液。
樣品的稀釋濃度
同樣是不可忽視的因素,由於樣品中不可避免存在一些細小的顆粒,尤其是核酸樣品。這些小顆粒的存在干擾測試效果。為了最大程度減少顆粒對測試結果的影響,要求核酸吸光值至少大於0.1A ,吸光值最好在0.1-1.5 A。在此范圍內,顆粒的干擾相對較小,結果穩定。從而意味著樣品的濃度不能過低,或者過高(超過光度計的測試范圍)。
操作因素
如混合要充分,否則吸光值太低, 甚至出現負值;混合液不能存在氣泡,空白液無懸浮物,否則讀數漂移劇烈;必須使用相同的比色杯測試空白液和樣品,否則濃度差異太大;換算系數和樣品濃度單位選擇一致;不能採用窗口磨損的比色杯;樣品的體積必須達到比色杯要求的最小體積等多個操作事項。
各波長具體含義及相關問題1. A260nm
是核酸最高吸收峰的吸收波長,最佳測量值的范圍為0.1至1.0。如果不在此范圍,稀釋或濃縮樣品,使之在此范圍內;如果吸光度小於0.05,檢查是否存在操作因素(如移液不準確,樣品內有懸浮物等)影響。DNA樣品的A260 吸光度值是否>0.1。(請注意,這個值跟儀器無關,核酸的吸光度必需大於0.1,其值才有效和可靠,因為樣品中的雜質和顆粒這些不純物的干擾通常會對光有一定吸收,其值<0.1);
朗伯-比爾定律:
A 吸光值
I0 入射光強度
I 投射光強度
c 吸光物質的摩爾濃度(mol/L)
d 光通過的液層厚度(cm)
ε 摩爾吸光系數(Lmol-1cm-1)
2. A280nm
是蛋白和酚類物質最高吸收峰的吸收波長,比值可進行核酸樣品純度評估:純DNA的A260/A280比值為1.8,純RNA為2.0。如果比值低,表示受到蛋白(芳香族)或酚類物質的污染,需要純化樣品。比值=1.5相當於50%蛋白質/DNA溶液
3. A230nm
是碳水化合物最高吸收峰的吸收波長,比值可進行核酸樣品純度評估:純DNA和 RNA的A260/A230比值為2.5。若比值小於2.0標明樣品被碳水化合物(糖類)、鹽類或有機溶劑污染,需要純化樣品。A230產生負值主要是由於在很低DNA 濃度的溶液中的一些其他成分的干擾所導致的。在下一個測定中,需要降低樣品的稀釋度,A230的負值會被校正。
4. A320nm或A340nm
為檢測溶液樣品的濁度和其他干擾因子。該值應該接近0.0。如果不是,標明溶液中有懸浮物,需要純化樣品。純樣品的A320一般是 0。
5. A260/A280和A260/A230
是核酸純度的指示值,純度好的DNA,在pH7-8.5 下其比值應該在2.0 或2.5,A260 / A280的比值, 用於評估樣品的純度, 因為蛋白的吸收峰是280 nm。 純凈的樣品比值大於1.8(DNA)或者2.0(RNA)。如果比值低於1.8 或者2.0,表示存在蛋白質或者酚類物質的影響。
A230是多肽、芳香基團、苯酚和一些碳氫化合物的吸光度,A230表示樣品中存在一些污染物,如碳水化合物、多肽、苯酚等,較純凈的核酸A260/A230的比值大於2.0 。A280是蛋白質的吸光度。
④ DNA、RNA、蛋白定量儀器
你說的儀器只有微量紫外分光光度計,這東西不可能低於一萬的,國產的也是十內萬級容的,美國熱電公司的都是幾十萬級的。不過普通的紫外分光光度計便宜,可以更換微量的比色皿達到微量測量的目的,但也不會少於一萬,涉及到紫外檢測器的儀器都不可能低於一萬,除非是二手。
⑤ 核酸檢測實驗室主要儀器有哪些
1、核酸提取儀
核酸提取儀是實驗室的必備儀器,應用配套的核酸提取試劑能夠自動完成樣本核酸的提取工作。核酸提取儀是通過磁珠提取法研製出來的一種高通量、高靈敏度的自動核酸純化提取設備。可以利用機器磁棒架上的磁棒,將吸附有核酸的磁珠移動至不同試劑孔內,經過細胞裂解、核酸吸附、清洗與洗脫等處理,即可得到高純度的核酸。
2、離心機
離心機也是實驗室最基本的儀器,主要是血液離心和DNA、RNA樣品核酸提取時用。這里推薦湖南可成離心機。
迷你離心機可使用可成Super MiniStar迷你離心機,微型離心機外觀新穎獨特,靈巧多用,配備兩種離心轉子和多種試管套,適用於1.5ml、0.5ml、0.2ml離心管和PCR用0.2ml,8連排離心管。
台式高速離心機使用可成台式高速離心機1-16K,該機型體積小,佔用空間小,微機控制,配微量轉子,離心速度上升快,離心效率高,常用於DNA樣品核酸提取。
台式低溫高速離心機可用可成台式高速冷凍離心機 1-16KR,此機型體積小巧,設計緊湊,進口高能效環保製冷系統,具有優良的溫度控制性能,製冷快,是RNA樣品核酸提取的理想選擇。
台式低速離心機推薦使用可成台式低速離心機4-5N,此機型採用無碳刷變頻電機,操作寧靜噪音低,可快速分離血清。且離心腔內設有獨立紫外線滅菌裝置,能使細菌、病毒喪失生存力及繁殖力進而消滅細菌、病毒,達到消毒滅菌成效。
⑥ 檢測DNA和RNA檢測方法有什麼區別
您好!檢測DNA的方法有:1.光密度測定。2.瓊脂糖電泳凝膠檢測法。回3。二苯胺法。
檢測RNA的方法有:1.光密度測答定。2.苔黒酚法。
主要的嘧啶和嘌呤具有共軛雙鍵,使鹼基,核苷,核苷酸和核酸在240-290nm的紫外波段有一段強烈的吸收峰,因此核酸具有紫外吸收特性,在260nm,處是最大的紫外光吸收值,根據朗波-比爾光吸收定律來計算出核酸含量。
⑦ 如何測量RNA濃度
1、超微量分光光度計測260nm吸收值計算。
可以定量溶於緩沖液的寡核苷酸,單鏈、雙鏈DNA,以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波長260 nm。
2、也可以用RNA膠(凝膠成像)檢測。例如:原核生物的核糖體所含的rRNA有5S、16S及23S三種。在膠上就有三條明顯大小不一的條帶。凝膠遷移分析。可以用來研究RNA-蛋白相互作用。基本原理是:結合了蛋白的RNA在凝膠中的遷移速率更慢,因而可以區分出結合蛋白與未結合蛋白的RNA條帶。
(7)測dna和rna濃度儀器有什麼擴展閱讀
1、RNA的功能是:
(1)具有肽醯轉移酶的活性。
(2)為tRNA提供結合位點。
(3)在蛋白質合成起始時,參與同mRNA選擇性的結合,在肽鏈的延伸中與mRNA結合。
2、原核生物的rRNA分三類:5SrRNA、16SrRNA和23SrRNA。
真核生物的rRNA分四類:5SrRNA、5.8SrRNA、18SrRNA和28SrRNA。
S為大分子物質在超速離心沉降中的一個物理學單位,可間接反映分子量的大小。原核生物和真核生物的核糖體均由大、小兩種亞基組成。
3、凝膠成像對DNA或RNA膠 進行切膠、拍照、觀察、分析的實驗室類儀器,凝膠成像系統可以應用於分子量計算、密度掃描、密度定量、PCR定量等生物工程常規研究。
⑧ 用什麼方法檢測產品是否含有DNA 和rna
DNA和RNA作為遺傳物質,本身都有自己的特性,用於檢測的方法也有很多,如下:
首先我們要知道:
DNA:為雙鏈結構,由A 、C 、G、T組成,鏈有外顯子和內含子區域,物質性質中A260/A280在1.8左右,在260nm出有最大吸收峰。
tRNA的二級和高級結構
1、抽提試劑盒分別抽提:將產品分成兩份,其中一份用來抽提DNA,此樣本加入RNA 酶,另一份用來抽提RNA,此樣本加入Dnase I,由此抽提出來的核酸進行瓊脂糖凝膠電泳或者aligent 4200/2100儀器檢測,考慮到DNA和RNA可能會降解,只有樣本完好時,才能輕易地辨別出來。
2、qPCR技術:如1中所示,用1中的樣本進行qPCR驗證,設計引物時DNA樣本跨外顯子區域,或者是單獨設計內含子區,加標准品對照,RNA正常設計即可,由此得出的結果可以根據擴增長度和兩個結果進行判定。
以上為兩個最基本的方法,操作簡單,成本可控,兩個結合起來結果准確,當然還有一些其他的方法,並設計對照試驗,採用控制變數法進行研究。
⑨ 鑒定DNA 和RNA分布所用的試劑是。。。
健那綠染液
⑩ 哪些型號的酶標儀可以檢測rna dna 純度
不叫酶標儀吧,叫分光光度計,比較多人用nanodrop,進口的比較貴,也有國產的,是根據吸光度檢測的,一般酶標儀是用來檢測免疫反應的,elisa出來的濃度