引物合成需要什麼儀器
1. PCR擴增除引物需要花錢合成,還有哪些試劑需要購買,哪些試劑需要合成
需要購抄買的 做pcr擴增襲用的試劑: PCRmix,或者酶,dntp等,電泳的試劑:膠,buffer,核酸染料,marker。如果做熒光定量或者測序,需要熒光修飾的引物,還得合成。
耗材:pcr板,吸頭,pcr管。還有很多別的東西。華科鑒聯基因科技提供所有pcr的相關試劑和耗材,儀器
2. pcR儀與DNA合成儀的區別是什麼
PCR儀合成的也是雙鏈DNA,簡單點說,PCR儀是利用現有基因與相應的引物及DNA聚合酶內實現短時間容對於目標基因的大量擴增。
DNA合成儀是在體外合成設計的基因,比如PCR需要的引物,就需要用DNA儀合成。
PCR儀PCR就是利用DNA聚合酶對特定基因做體外或試管內In Vitro的大量合成,基本上它是利用DNA聚合酶進行專一性的連鎖復制。
DNA合成儀是設計用於合成結構上類似DNA或RNA的寡核苷酸的自動化儀器。一般應用於固相合成法,每次將一個核苷酸加到所接長的寡核苷酸鏈上,加入每一個核苷酸都利用相同的化學反應與相應的嘌呤或嘧啶鹼基衍生物作用。所用化學反應和操作細節隨不同的儀器而改變,最廣泛應用的方法是DNA合成的磷酸醯胺法。
3. 求PCR引物合成的具體方法
這個一般交給公司合成,華大就可以合成。自己要合成除非有相應的儀器。公專司一般應屬該用化學法合成,就是提供基團保護的核苷酸,然後去掉某一保護基團,催化鏈延伸,然後再加入另一種核苷酸。原理很簡單,就是序列正確性的控制很難,那些儀器好像是在很微小的體系裡反應,不斷的洗掉舊的核苷酸,加入新的核苷酸,來合成正確序列。
4. DNA合成儀與PCR儀有什麼區別
合成儀無需模板和引物、DNA聚合酶,而是按照人們預先設定的DNA序列,從無到有,從頭內合成(denove),容以循環的化學反應合成出DNA鏈(第一個是掛在固相載體上的,以後每次反應通過提供底物-連接反應-洗滌等步驟),而且是單鏈。
PCR儀需要模板、引物和聚合酶,本質是生物合成,一般採用一對引物,合成的是雙鏈DNA,無需固相載體。合成的模板序列可以是已知的也可以是未知的。
二者合成目的一般也不同。
5. PCR技術是如何合成引物的
目前引物合成基本採用固相亞磷醯胺三酯法。亞磷醯胺三酯法合成DNA片段,具有高效、快速的偶聯以及起始反應物比較穩定的特點。亞磷醯胺三酯法是將DNA固定在固相載體上完成DNA鏈的合成的,合成的方向是由待合成引物的3′端向5′端合成的,相鄰的核苷酸通過3′→5′磷酸二酯鍵連接。
第一步是將預先連接在固相載體CPG上的活性基團被保護的核苷酸與三氯乙酸反應,脫去其5′-羥基的保護基團DMT,獲得游離的5′-羥基。
第二步,合成DNA的原料,亞磷醯胺保護核苷酸單體,與活化劑四氮唑混合,得到核苷亞磷酸活化中間體,它的3′端被活化,5′-羥基仍然被DMT保護,與溶液中游離的5′-羥基發生縮合反應。
第三步,帶帽(capping)反應,縮合反應中可能有極少數5′-羥基沒有參加反應(少於2%),用乙酸酐和1-甲基咪唑終止其後繼續發生反應,這種短片段可以在純化時分離掉。
第四步,在氧化劑碘的作用下,亞磷醯形式轉變為更穩定的磷酸三酯。
經過以上四個步驟,一個脫氧核苷酸被連接到固相載體的核苷酸上。再以三氯乙酸脫去它的5′-羥基上的保護基團DMT,重復以上步驟,直到所有要求合成的鹼基被接上去。合成過程中可以觀察TCA處理階段的顏色判定合成效率。通過氨水高溫處理,連接在CPG上的引物被切下來,通過OPC, PAGE等手段純化引物,成品引物用C18濃縮,脫鹽,沉澱。沉澱後的引物用水懸浮,測定OD260定量,根據定單要求分裝。
6. 化學合成實驗需要什麼設備
電泳
離心機
乾燥室乾燥箱、電動離心機和隔焰爐等氣相色譜、液相色譜也要用到的
我是做實驗室儀器設備的
呵呵
7. 引物是怎麼合成的
自己把引物序列設計好,(郵件)填表把它發送到上海生工公司,他們會引物合成好,裝在EP管里寄給你啊。
8. 引物是如何合成的
亞磷醯胺三酯抄法是將DNA固定在固相載體上襲完成DNA鏈的合成的,合成的方向是由待合成引物的3'端向5'端合成的,相鄰的核苷酸通過3'→5'磷酸二酯鍵連接。
第一步是將預先連接在固相載體CPG上的活性基團被保護的核苷酸與三氯乙酸反應,脫去其5'-羥基的保護基團DMT,獲得游離的5'-羥基;
第二步,合成DNA的原料,亞磷醯胺保護核苷酸單體,與活化劑四氮唑混合,得到核苷亞磷酸活化中間體,它的3'端被活化,5'-羥基仍然被DMT保護,與溶液中游離的5'-羥基發生縮合反應。
第三步,帶帽(capping)反應,縮合反應中可能有極少數5'-羥基沒有參加反應(少於2%),用乙酸酐和1-甲基咪唑終止其後繼續發生反應,這種短片段可以在純化時分離掉。
第四步,在氧化劑碘的作用下,亞磷醯形式轉變為更穩定的磷酸三酯。
9. PCR引物怎麼合成
這是最重要的一步。理想的,只同目的序列兩側的單一序列而非其它序列版退火的primer要符合下面的 一些條件權
1) 足夠長,18-24bp,以保證特異性.當然不是說越長越好,太長的primer同樣會降低特異性,並且降低產量
2) GC% 40%~60%
3) 5'端和中間序列要多GC,以增加穩定性
4) 避免3'端GC rich, 最後3個BASE不要有GC,或者最後5個有3個不要是GC (有人說:3' 端最好是 GC/CG/CC/GG。)
5) 避免3'端的互補, 否則容易造成DIMER
6) 避免3'端的錯配
7) 避免內部形成二級結構
8) 附加序列(RT site, Promoter sequence)加到5'端, 在算Tm值時不算,但在檢測互補和二級結構是要加上它們
9) 使用兼並primer時, 要參考密碼子使用表,注意生物的偏好性,不要在3'端使用兼並primer,並使用 較高的primer濃度(1uM-3uM)
10) 最好學會使用一種design software. PP5,Oligo6,DNAstar, Vector NTI, Online design et al.
10. 做化學合成一般要用到什麼分析儀器
做化學合成一般要用到的分析儀器:
1、滴定管、容量瓶、移液管;
2、分析天平;比重計(密度計);
3、pH計;濁度計;電導率計;
4、可見、紫外光度計;紅外光譜儀;
5、氣相色譜儀;