切割dna用什么酶

① 限制性内切酶如何切割，外源DNA怎么连上去

这一过程需借助两种酶：限制性核酸内切酶和DNA连接酶。

限制性核酸内专切酶是可以识别特定的脱属氧核苷酸序列，并在每条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键进行切割的一类酶，简称限制酶。

DNA连接酶利用NAD或ATP中的能量催化两个核酸链之间形成磷酸二酯键。反应过程可分三步：

(1)NAD+或ATP将其腺苷酰基转移到DNA连接酶的一个赖氨酸残基的ε─氨基上形成共价的酶-腺苷酸中间物，同时释放出烟酰胺单核苷酸(NMN)或焦磷酸。

(2)将酶-腺苷酸中间物上的腺苷酰基再转移到DNA的5'-磷酸基端，形成一个焦磷酰衍生物，即DNA-腺苷酸;

(3)这个被激活的5'-磷酰基端可以和DNA的3'-OH端反应合成磷酸二酯键，同时释放出AMP。

② 有关DNA的几种酶

DNA限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上,并切割双链DNA。它可分为三类:Ⅰ类和Ⅲ类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和修饰(甲基化)作用且依赖于ATP的存在。Ⅰ类酶结合于识别位点并随机的切割识别位点不远处的DNA，而Ⅲ类酶在识别位点上切割DNA分子,然后从底物上解离。Ⅱ类由两种酶组成: 一种为限制性内切核酸酶(限制酶),它切割某一特异的核苷酸序列; 另一种为独立的甲基化酶,它修饰同一识别序列。Ⅱ类中的限制性内切酶在分子克隆中得到了广泛应用，它们是重组DNA的基础。绝大多数Ⅱ类限制酶识别长度为4至6个核苷酸的回文对称特异核苷酸序列(如EcoRⅠ识别六个核苷酸序列:5'- G↓AATTC-3'),有少数酶识别更长的序列或简并序列。Ⅱ类酶切割位点在识别序列中,有的在对称轴处切割,产生平末端的DNA片段(如SmaⅠ:5'-CCC↓GGG-3');有的切割位点在对称轴一侧,产生带有单链突出末端的DNA片段称粘性未端, 如EcoRⅠ切割识别序列后产生两个互补的粘性末端。

DNA外切酶是一类能从多核苷酸链的一端开始按序催化水解3、5-磷酸二酯键，降解核苷酸的酶。其水解的最终产物是单个的核苷酸（DNA为dNTP，RNA为NTP）。按作用的特性差异可以将其分为单链的核酸外切酶和双链的核酸外切酶。

DNA聚合酶 , 以DNA为复制模板，从将DNA由5'端点开始复制到3'端的酶。
DNA聚合酶的主要活性是催化DNA的合成（在具备模板、引物、dNTP等的情况下）及其相辅的活性。
真核细胞有5种DNA聚合酶，分别为DNA聚合酶α（定位于胞核，参与复制引发具5－3外切酶活性），β（定位于核内，参与修复，具5－3外切酶活性），γ（定位于线粒体，参与线粒体复制具5－3和3－5外切活性），δ（定位核，参与复制，具有3－5和5－3外切活性），ε（定位于核，参与损伤修复，具有3－5和5－3外切活性）。
原核细胞有3种DNA聚合酶，都与DNA链的延长有关。DNA聚合酶I是单链多肽，可催化单链或双链DNA 的延长；DNA聚合酶II则与低分子脱氧核苷酸链的延长有关；DNA聚合酶III在细胞中存在的数目不多，是促进DNA链延长的主要酶。

DNA连接酶是1967年在三个实验室同时发现的，最初是在大肠杆菌细胞中发现的。它是一种封闭DNA链上缺口酶，借助ATP或NAD水解提供的能量催化DNA链的5'-PO4与另一DNA链的3'-OH生成磷酸二酯键。但这两条链必须是与同一条互补链配对结合的(T4DNA连接酶除外)，而且必须是两条紧邻DNA链才能被DNA连接酶催化成磷酸二酯键。

③ DNA重组技术，使用限制酶切割DNA时，为什么不需要解旋酶

1.在DNA重组技术中，需要将目的基因和质粒载体连接起来。因此，需要切割含目的基版因的DNA分子和质粒载体，使权磷酸二酯键断裂，再用DNA连接酶将它们连接起来。
2.限制酶能够识别特定的脱氧核苷酸序列，并在特定的位点切割DNA分子，使磷酸二酯键断裂。而解旋酶作用于两条DNA链间的氢键，使氢键断裂，DNA解旋，形成单链。
3.综上所述，DNA重组技术，使用限制酶切割DNA时，不需要解旋酶。

④ 限制酶切割目的基因和载体用同一种酶，但是目的基因切两个割下来 ，载体只切一刀，怎么用同种酶

限制酶切割目的基因和载体用同一种酶，但是目的基因切两个割下来 ，载体只切一刀，怎么用同种酶？？？
分子生物学 生物化学 微生物 脱氧核糖核酸（DNA） 生

⑤ 基因工程中主要的工具酶有哪几种，它们的作用是什么

基因工程工具酶主要包括限制酶、聚合酶、连接酶、修饰酶和核酸酶五大类，具体解释如下：

1、DNA限制性内切酶

生物体内能识别并切割特异的双链DNA序列的一种内切核酸酶。它是可以将外来的DNA切断的酶，即能够限制异源DNA的侵入并使之失去活力，但对自己的DNA却无损害作用，这样可以保护细胞原有的遗传信息；

2、连接酶

它是一种封闭DNA链上缺口酶，借助ATP或NAD水解提供的能量催化DNA链的5'-PO4与另一DNA链的3'-OH生成磷酸二酯键；

3、聚合酶

系专司生物催化合成脱氧核糖核酸和核糖核酸的一类酶的统称；

4、核酸酶

核酸酶有DNase、RNase、核酸酶S1等，可水解相应的DNA和RNA，核酸酶S1可降解单链DNA和RNA，用量增大也可降解双链核酸，它可用于切去ds-cDNA合成中产生的发夹环；

5、修饰酶

体内有些酶可在其他酶的作用下，将酶的结构进行共价修饰，使该酶活性发生改变，这种调节称为共价修饰调节。

(5)切割dna用什么酶扩展阅读：

工具酶的相关应用——多重放大技术：

为了获得更高的检测灵敏度，将多种信号放大技术结合起来使用是一种有效途径。基于切刻内切酶与DNA聚合酶组合作用的等温循环链置换放大技术，是近年来被广泛使用的一种工具酶组合信号放大技术。

该技术的基本原理是：通过碱基的互补配对杂交形成切刻内切酶的识别位点后，切刻内切酶在该位点对其中的一条核酸链进行切刻作用产生3′端为羟基的切口。

聚合酶识别该切口的3′端，以未切割的序列为模板，沿着3′到5′的方向复制聚合置换被切割链的另一段序列，最后形成一条完整的双链结构。形成的双链DNA再次被切刻内切酶识别剪切，启动聚合酶反应。

参考资料来源：网络-工具酶

⑥ 最好用哪种酶切割质粒，用哪种酶切割目的基因所在DNA

两种酶同时处理 这样不会出现三种产物 不会环化 容易得到产物 避免筛选与检测

⑦ 两种酶怎么切割DNA请画图，还有目的基因的切割

这是高中生物选修阶段的内容，DNA有链装和环装两种，两种酶的切割位点未知，目的回基因也不知道是答处于哪个位置，建议给出具体的题目来更好的解答。
如果要获取目的基因，那两种酶不能破坏他，然后用两种酶可以防止自身环化

⑧ 基因剪刀是什么酶

考点复： 基因工程的原理及技术 专题：制 分析： 基因工程中要对目的基因进行切割、改造、修饰和拼接，然后导入受体细胞，使重组DNA分子在细胞中表达．要实现这一精确的操作过程至少需要三种工具：准确切割DNA的“手术刀”--限制性核酸内切酶，将DNA片段连接起来的“缝合针”--DNA连接酶，将体外重组好的DNA导入受体细胞的“运输工具”--基因的载体． A、DNA连接酶能够将限制酶切割的末端连接，是基因工程的“缝合针”，A错误；B、DNA聚合酶一般用于合成DNA，不属于基因工程的操作工具，B错误；C、蛋白质水解酶用于水解蛋白质，不属于基因工程的操作工具，C错误；D、限制性核酸内切酶内特异性识别特定的核苷酸系列，在基因工程能够在特定的核苷酸序列出切割质粒和目的基因，故称为基因工程的“剪刀”，D正确．故选：D． 点评： 本题考查基因工程相关知识，考生要能够识记基因工程三种工具的作用，能够根据作用的特点对应“手术刀”、“缝合针”和“运输工具”，属于简单题．

⑨ 切割DNA用什么酶比较好

限制性核酸内切酶

⑩ dna分子经限制酶切割产生的dna片段末端通常用的两种方式是哪两种

简单来说，限制性内切酶识别DNA序列中的回文序列。有些酶的切割位点在回文版的一侧（如EcoR I、BamH I、Hind等）权，因而可形成粘性末端，另一些Ⅱ类酶如Alu I、BsuR I、Bal I、Hal Ⅲ、HPa I、Sma I等，切割位点在回文序列中间，形成平整末端。