小鼠腹水制备需要哪些仪器

⑴ 小鼠腹水做westren-blot的稀释比例是多少

在测定血样时，首先应去除蛋白质。去除蛋白质可使结合型的药物均出来，以便测定专药物的总浓度；属去除蛋白质也可预防提取过程中蛋白质发泡，减少乳化的形成，以及可以保护仪器性能（如保护HPLC柱不被沾污），延长使用期限。去除蛋白法有以下几种。
1.加入与水相混溶的有机溶剂加入水溶性的有机溶剂；可使蛋白质的分子内及分子间的氢键发生变化而使蛋白质凝聚，使与蛋白质结合的药物释放出来。
2.加入中性盐加入中性盐，使溶液的离子强度发生变化。中性盐能将与蛋白质水合的水置换出来，从而使蛋白质脱水而沉淀。

⑵ 杂交瘤制备小鼠腹水抗体问题求助

A、制备单抄克隆抗体时，需要给小鼠注射特定抗原，再从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞，故A正确；
B、采用一定的技术将B细胞与骨髓瘤细胞融合获得杂交瘤细胞，故B错误；
C、诱导细胞融合后，除了产生杂交瘤细胞，还会产生B淋巴细胞自身融合的细胞、骨髓瘤细胞自身融合的细胞等，因此需要用选择培养基筛选出杂交瘤细胞，故C正确；
D、筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞后，还需克隆化培养，有两种方法，即培养基中培养和注入小鼠腹腔中培养，最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体，故D正确．

⑶ 制备单克隆抗体时注入小鼠腹腔比用培养液培养有何优点

单克隆抗体制备有两种方法。

第一种方法是：增量培养版法，即将杂交瘤细胞在体外权培养，在培养液中分离单克隆抗体。该法需用特殊的仪器设备，一般应用无血清培养基，以利于单克隆抗体的浓缩和纯化。

第二种也是最普遍采用的方法是小鼠腹腔接种法。选用BALB/c小鼠或其亲代小鼠，先用降植烷或液体石蜡行小鼠腹腔注射，一周后将杂交瘤细胞接种到小鼠腹腔中去。通常在接种一周后即有明显的腹水产生，每只小鼠可收集5～10ml的腹水，有时甚至超过40ml。该法制备的腹水抗体含量高，每毫升可达数毫克甚至数十毫克水平。此外，腹水中的杂蛋白也较少，便于抗体的纯化。接种细胞的数量应适当，一般为500000/鼠，可根据腹水生长情况适当增减。

⑷ 单克隆抗体的制备过程

过程
1）免疫脾细胞的制备 制备单克隆抗体的动物多采用纯系 Balb/c小鼠。免疫的方法取决于所用抗原的性质。免疫方法同一般血清的制备，也可采用脾内直接免疫法。
2）骨髓瘤细胞的培养与筛选 在融合前，骨髓瘤细胞应经过含8-AG的培养基筛选，防止细胞发生突变恢复HGPRT的活性（恢复HGPRT的活性的细胞不能在含8-AG的培养基中存活）。骨髓瘤细胞用10%小牛血清的培养液在细胞培养瓶中培养，融合前24h换液一次，使骨髓瘤细胞处于对数生长期。
3）细胞融合的关键:
1技术上的误差常常导致融合的失败。例如，供者淋巴细胞没有查到免疫应答。这必然要失败的。
2融合试验最大的失败原因是污染，融合成功的关键是提供一个干净的环境，以及适宜的无菌操作技术。

4）阳性克隆的筛选 应尽早进行。通常在融合后10天作第一次检测，过早容易出现假阳性。检测方法应灵敏、准确、而且简便快速。具体应用的方法应根据抗原的性质，以及所需单克隆抗体的功能进行选择。常用的方法有 RIA法、 ELISA法和免疫荧光法等。其中ELISA法最简便，RIA法最准确。阳性克隆的筛选应进行多次，均阳性时才确定为阳性克隆进行扩增。
5）克隆化 克隆化的目的是为了获得单一细胞系的群体。克隆化应尽早进行并反复筛选。这是因为初期的杂交瘤细胞是不稳定的，有丢失染色体的倾向。反复克隆化后可获得稳定的杂交瘤细胞株。克隆化的方法很多，而最常用的是有限稀释法。
（1）显微操作法：在显微镜下取单细胞，然后进行单细胞培养。这种方法操作复杂，效率低，故不常用。
（2）有限稀释法：将对数生长期的杂交瘤细胞用培养液作一定的稀释后，按每孔1个细胞接种在培养皿中，细胞增值后成为单克隆细胞系。第一次克隆化时加一定量的饲养细胞。由于第一次克隆化生长的细胞不能保证单克隆化，所以为获得稳定的单克隆细胞株需经2～3次的再克隆才成。应该注意的是，每次克隆化过程中所有有意义的细胞都应冷冻保存，以便重复检查，避免丢失有意义的细胞。
（3）软琼脂法：将杂交瘤细胞稀释到一定密度，然后与琼脂混悬。在琼脂中的细胞不能自由移动，彼此互不相混，从而达到单细胞培养的目的。但此法不如有限稀释法好。
（4）荧光激光细胞分类法：用抗原包被的荧光乳胶微球标记杂交瘤细胞，然后根据抗原与杂交瘤细胞结合的特异性选出细胞，并进行单细胞培养。

6）细胞的冻存与复苏
7）大规模单克隆抗体的制备 选出的阳性细胞株应及早进行抗体制备，因为融合细胞随培养时间延长，发生污染、染包体丢失和细胞死亡的机率增加。抗体制备有两种方法。一是增量培养法，即将杂交瘤细胞在体外培养，在培养液中分离单克隆抗体。该法需用特殊的仪器设备，一般应用无血清培养基，以利于单克隆抗体的浓缩和纯化。最普遍采用的是小鼠腹腔接种法。选用BALB/c小鼠或其亲代小鼠，先用降植烷或液体石蜡行小鼠腹腔注射，一周后将杂交瘤细胞接种到小鼠腹腔中去。通常在接种一周后即有明显的腹水产生，每只小鼠可收集5～10ml的腹水，有时甚至超过40ml。该法制备的腹水抗体含量高，每毫升可达数毫克甚至数十毫克水平。此外，腹水中的杂蛋白也较少，便于抗体的纯化。

⑸ 如何提高单抗小鼠腹水产量

1、单抗的大规模制备
目前大量制备单抗的方法主要有两大系统，一是动物体内生产法，这是国内外实验室所广泛采用；另一是体外培养法。
（1）动物体内生产单抗的方法
迄今为止，通常情况下均采用动物体内生产单抗的方法，鉴于绝大多数动物用杂交瘤均由BALB/c小鼠的骨髓瘤细胞与同品系的脾细胞融合而得，因此使用的动物当然首选BALB/c小鼠。本方法即将杂交瘤细胞接种于小鼠腹腔内，在小鼠腹腔内生长杂交瘤，并产生腹水，因而可得到大量的腹水单抗且抗体浓度很高。可见该法操作简便、经济，不过，腹水中常混有小鼠的各种杂蛋白（包括Ig），因此在很多情况下要提纯后才能使用，而且还有污染动物病毒的危险，故而最好用SPF级小鼠。
（2）体外培养生产单抗的方法
总体上讲，杂交瘤细胞系并不是严格的贴壁依赖细胞（anchoragedependentcell，ADC），因此既可以进行单层细胞培养，又可以进行悬浮培养。杂交瘤细胞的单层细胞培养法是各个实验室最常用的手段，即将杂交瘤细胞加入培养瓶中，以含10-15%小牛血清的培养基培养，细胞浓度以1×106-2×106/ml为佳，然后收集培养上清，其中单抗含量约10-50ug/ml。显然，这种方法制备的单抗量极为有限，无疑是不适用于单抗的大规模生产。要想在体外大量制备单抗，就必须进行杂交瘤细胞的大量（高密度）培养。单位体积内细胞数量越多，细胞存活时间越长，单抗的浓度就越高，产量就越大。

⑹ 几种方法纯化小鼠腹水IgG2b类单抗的比较

本试验采用多种蛋白A亲和层析法纯化小鼠腹水IgG2b类单克隆抗体,以期纯化出高纯度的IgG2b类单克隆抗体。1材料与方法1.1试验材料分泌型为IgG2b类鼠抗相思子毒素杂交瘤细胞株由本实验室保存,常规方法制备腹水,HiTrap rPro-tein A FF预装柱为Amersham Phamacia公司产品,蛋白检测试剂盒(BCA Protein Assay Kit)为美国Pierce公司产品,小鼠亚类鉴定试剂盒为Sigma公司产品,电泳槽为美国BIO-RAD公司产品,酶联免疫检测仪为美国BIO-RAD550型,其他试剂均为进口分装或国产分析纯化学试剂,试验用水为超纯水或去离子水。1.2腹水的处理方法采用二氧化硅吸附法对腹水进行初步处理。

⑺ 制备小鼠腹水瘤需要先在腹腔内注射石蜡油吗

石蜡是提前的免疫刺激 到时候能促进腹水产生 减少实体瘤的形成 你要的是实体瘤么？好像加大细胞密度就容易成瘤

⑻ 小鼠腹水是什么

在大量制备单克隆抗体中，将杂交瘤细胞注入小鼠腹腔让其大量生产单克隆抗体。

总而言之就是比较粗的单克隆抗体

⑼ 杂交瘤细胞的培养为什么要在小鼠体内小鼠腹水的主要

小鼠腹水就是小鼠的组织液,含有丰富的营养物质,适合进行动物细胞培养,相当于教材中提到的培养液.

⑽ 小鼠腹水单克隆抗体制备原理

正常小抄鼠用抗原免疫后，脾脏袭的B淋巴细胞(浆细胞)将产生特异性抗体，但这些细胞在体外不能长期存活。为了能使这些细胞在体外长期生存，并利用其产生抗体，可将免疫脾细胞与能无限止地培养、但不分泌抗原的小鼠骨髓瘤细胞进行融合，形成既具有免疫脾细胞分泌特异性抗体的能力，又有使恶性肿瘤细胞迅速无限制繁殖特性的B淋巴细胞杂交瘤，经筛选后克隆化，然后进行大量培养或接种到同系小鼠腹腔内，培养液、腹水或血清中就会产生大量高度的特异性抗体，这就是小鼠单克隆抗体。根据其原理，也可以生产人源单克隆抗体、大鼠单克隆抗体、人一小鼠单克隆抗体等。