蛋白质含量测定需要哪些仪器

① 现在国内检测蛋白质用什么方法涉及到哪些化学仪器

目前食品中蛋白质的测定方法有蛋白质自动分析仪，近红外自动测定仪，紫外分光光度法以及凯氏定氮法等。本文采用纳氏试剂作为显色剂测定食品中蛋白质含量，适用范围广，可用于各类食品及保健食品的检测。用本法对标准品、质控样品进行测定获得满意结果，对批量样品的快速测定更具有实用性。现将结果报告如下。

材料与方法

仪器与试剂 WFZ800-D3型紫外分光光度计(北京第二光学仪器厂)。分析纯硫酸、硫酸铜、硫酸钾。(1)纳氏试剂：称取碘化汞100g及碘化钾70g，溶于少量无氨蒸馏水中，将此溶液缓缓倾入己冷却的32%氢氧化钠溶液500ml中，并不停搅拌，再用蒸馏水稀释至1L，贮于棕色瓶中，用橡皮塞塞紧，避光保存。(2)硫酸铵标准储备溶液(1.0g/L)：精确称取经硫酸干燥的硫酸铵0.4720g，加水溶解后移入100mL容量瓶中，并稀释至刻度，混均此液每毫升相当于1.0mgNH3-N(10℃下冰箱内储存稳定1年以上)。(3)硫酸铵标准使用溶液(0.01g/L)：用移液管精密吸取1.0ml标准储备液(1.0g/L)于100ml容量瓶内，加水稀释至刻度，混匀，此溶液每毫升相当于10.0μg NH3-N。

方法

标准曲线绘制 取25ml比色管7支，分别准确吸取0.01g/L硫酸铵标准使用液0.00，0.5，1.0，3.0，5.0，7.0，10.0ml(相当于标准0.0，5.0，10.0，30.0，50.0，70.0，100.0μg)，加水至10ml刻度，于标准系列管中各加2ml纳氏试剂，混匀后放置10min，移入1cm比色皿内，以零管为参比，于波长420mm处测量吸光度，以标准管含量为横坐标(μg),对应的吸光度(A)值为纵坐标绘制标准曲线。

样品测定 选择牛奶和奶粉为检测样品。精密称取样品0.1～2.0g置于250ml三角瓶中，加入0.2gCuSO4、1.0gK2SO4、硫酸10ml，先小火加热，待内容物全部炭化，泡沫停止后，加大火力至液体呈蓝色，使H2SO4剩余量约为3ml左右为止，室温放冷后，沿瓶壁慢慢加入10ml水，移入100ml容量瓶中，用少量蒸镏水洗三角瓶3次，洗液全部并入容量瓶中，冷却，加蒸馏水至刻度，混匀。测定时取0.5ml，加水至10ml刻度，以后操作同标准曲线。同时做空白试验。

计算公式

X=c×Fm×V2V1×1000×1000×1000

式中：X-试样中蛋白质含量(g/100g或g/100ml)

C-试样测定液中扣除空白后氮的含量(μg)

V1-试样消化液定容体积(ml)

V2-测定用消化液体积(ml)

m-样品质量(g)或体积(ml)

F-氮换算为蛋白质的系数。

蛋白质的氮含量一般为15%～17.6%，按16%计算乘以6.25即为蛋白质，乳制品为6.38，面粉为5.7，肉及肉制品为6.25，大豆为5.71。

结果

2.1 测定波长选择 含氮量为30μg的标准管在显色后，在波长400～440mm范围内每间隔5nm进行测定，最大吸收波长为420mm。

显色剂用量选择 含氮量为30μg的标准管分别加入不同量的纳氏试剂，在420mm的波长下分别测定其吸光度结果。纳氏试剂显色剂加入量为1.5～3.0ml时吸光度基本无变化，本法选择加入纳氏试剂2.0ml。

显色时间及稳定性 含氮量为30μg的标准管经显色后，分别在10，30min，1，2，4，8h进行测定。显色后10min～8h内吸光度稳定无变化。本法选显色10min后测定。

标准曲线 回归方程：y=0.016X-1.5×10-3，r=0.9998，最佳线性范围0.0～100μg。

精密度 牛乳和奶粉2种样品分别取6份按本法重复测定6次，牛乳和奶粉精密度测定结果：平均数分别为3.06，23.50；标准差分别为±0.029，±0.073；相对标准偏差分别为0.31%，0.94%。

对2种样品利用标准加入法作回收试验(表1) 结果可见，回收率为95.50%～99.44%。

2种方法测定结果比较 分别用GB/T5009.5-2003凯氏定氮法与本法测定。结果显示，2种分析方法的测定结果差异无统计学意义(t=0.026，P>0.05)。

测定标准物质 用本法测定4种不同的蛋白质标准物质，测定结果与标准物质含量一致。

以纳氏试剂作为显色剂快速测定食品中蛋白质的方法特点简单、快速，适用于批量样品测定。在碱性条件下NH3-N与纳氏试剂反应生成的黄色化合物稳定。本法与国标凯氏定氮法进行比较t=0.026,P<0.05，n=32，2种方法测定结果无明显差异。测定范围广，线性范围宽0.0～100.0μg；精密度高；相对标准偏差为0.31%～0.94%；回收率好，加标回标率为95.50%～99.44%。用本法测定标准物质结果一致，用于质量控制样本测定结果满意。本法仪器试剂简单，易于基层普及，有利于推广应用。

② 请问我要做SDS测定蛋白质分子质量 都需要什么设备仪器和药品

电泳仪、还有N多聚丙烯酰胺胶的药品、一个摇床、大培养皿、考马斯亮蓝、牛血清白蛋白标准品等等，太多了。你不会从零准备吧？

③ 测定蛋白质的构型和功能要用什么仪器，有哪些步骤

你好，很高兴回答你的问题。

构型这个概念是指 一个有机分子中各个原子特有的固定的空间排列。这种排列不经过共价键的断裂和重新形成是不会改变的。构型的改变往往使分子的光学活性发生变化。蛋白质的构型就是一级结构，指其氨基酸排列顺序。

测定蛋白质的构型的主要有两种方法：Edman降解（Edman degradation）和质谱法。

EDMAN降解法测序是经典的方法，通过从多肽链游离的N末端（或者C末端，但是很少）测定氨基酸残基的序列的过程。N末端氨基酸残基被苯异硫氰酸酯修饰，然后从多肽链上切下修饰的残基，现在一般都是自动测序仪。

质谱法测蛋白只要是利用生物质谱仪，比如ESI-Q-TOF，ESI-IT-Obitraq。利用特异的酶将蛋白切成肽段， 然后通过质谱方法进行测定，产生数据或通过重头比对，或者通过生物信息学中数据库搜索的方法推断出肽段序列，然后再由肽段序列拼接处蛋白序列。这种方法是近些年来随着蛋白质组学的发展而广泛被使用，但是对于蛋白完整序列测定需要较强的生物信息学技术。

整体而言， EDMAN降解法准确， 但是耗时长， 而且对于所测定的肽段要求很高， 不能太长， 不能太难修饰等等， 一般能测个20-50碱基不错了。而质谱法方法快速，但是准确性比EDMAN降解法略差。

另外，楼主讲的蛋白功能测定，不同的蛋白质功能各异，蛋白功能主要通过生物学实验反复验证次得到，这个比较复杂，没有固定的模式，要逐一研究。

另外，像核磁仪可以用来研究蛋白的构象或者说晶体结构，表面等离子共振仪器可以用来研究蛋白蛋白相互作用，等等，蛋白质是未来有限的生物研究资源，现在全世界对蛋白质的研究热情都很高。也有许多相关的基础科教书，楼主感兴趣可以去看看。

纯手工打造，希望采纳哦。

④ 测量蛋白质氮含量的常用仪器

食品中蛋白质含量测定（凯氏定氮法）
（5009．5-2003食品中蛋白质含量测定）
一、目的与要求
1、学习凯氏定氮法测定蛋白质的原理。
2、掌握凯氏定氮法的操作技术，包括样品的消化处理、蒸馏、滴定及蛋白质含量计算等。
二、实验原理
蛋白质是含氮的化合物。食品与浓硫酸和催化剂共同加热消化，使蛋白质分解，产生的氨与硫酸结合生成硫酸铵，留在消化液中，然后加碱蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后，再用盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量来乘以蛋白质换算系数，即得蛋白质含量。
因为食品中除蛋白质外，还含有其它含氮物质，所以此蛋白质称为粗蛋白。
三、仪器与试剂
（一）试剂
1、硫酸铜（CuSO4•5H20）
2、硫酸钾
3、硫酸（密度为1.8419g/L）
4、硼酸溶液（20g/L）
5、氢氧化钠溶液（400g/L）
6、0.01mol/L盐酸标准滴定溶液。
7、混合指示试剂：0.1%甲基红乙溶液液1份，与0.1%溴甲酚绿乙醇溶液5份临用时混合。
8、黄豆粉。
（二）仪器
微量定氮蒸馏装置：如图3- 所示。

图3- 微量凯氏定氮装置
1、电炉； 2、水蒸气发生器（2L平底烧瓶）；3、螺旋夹a；
4、小漏斗及棒状玻璃塞（样品入口处）；5、反应室；6、反应室外层；
7、橡皮管及螺旋夹b；8、冷凝管；9、蒸馏液接收瓶。
四、实验步骤
1、样品消化
称取黄豆粉约0.3g（±0.001g），移入干燥的100mL凯氏烧瓶中，加入0.2g硫酸铜和6g硫酸钾，稍摇匀后瓶口放一小漏斗，加入20mL浓硫酸，将瓶以450角斜支于有小孔的石棉网上，使用万用电炉，在通风橱中加热消化，开始时用低温加热，待内容物全部炭化，泡沫停止后，再升高温度保持微沸，消化至液体呈蓝绿色澄清透明后，继续加热0.5h，取下放冷，小心加20mL水，放冷后，无损地转移到100mL容量瓶中，加水定容至刻度，混匀备用，即为消化液。
试剂空白实验：取与样品消化相同的硫酸铜、硫酸钾、浓硫酸，按以上同样方法进行消化，冷却，加水定容至100mL，得试剂空白消化液。
2、定氮装置的检查与洗涤
检查微量定氮装置是否装好。在蒸气发生瓶内装水约三分之二，加甲基红指示剂数滴及数毫升硫酸，以保持水呈酸性，加入数粒玻璃珠（或沸石）以防止暴沸。
测定前定氮装置如下法洗涤2~3次：从样品进口入加水适量（约占反应管三分之一体积）通入蒸汽煮沸，产生的蒸汽冲洗冷凝管，数分钟后关闭夹子a，使反应管中的废液倒吸流到反应室外层，打开夹子b由橡皮管排出，如此数次，即可使用。
3、碱化蒸馏
量取硼酸试剂20mL于三角瓶中，加入混合指示剂2~3滴，并使冷凝管的下端插入硼酸液面下，在螺旋夹a关闭，螺旋夹b开启的状态下，准确吸取10.0mL样品消化液，由小漏斗流入反应室，并以10mL蒸馏水洗涤进样口流入反应室，棒状玻塞塞紧。使10mL氢氧化钠溶液倒入小玻杯，提起玻塞使其缓缓流入反应室，用少量水冲洗立即将玻塞盖坚，并加水于小玻杯以防漏气，开启螺旋夹a，关闭螺旋夹b，开始蒸馏。通入蒸汽蒸腾10min后，移动接收瓶，液面离开凝管下端，再蒸馏2min。然后用少量水冲洗冷凝管下端外部，取下三角瓶，准备滴定。
同时吸取10.0mL试剂空白消化液按上法蒸馏操作。
4、样品滴定
以0.01mol/L盐酸标准溶液滴定至灰色为终点。
5、数据记录
项 目 第一次 第二次 第三次
样品消化液（mL）
滴定消耗盐酸标准溶液（mL）
消耗盐酸标准溶液平均值（mL）
五、结果计算

式中 X——样品蛋白质含量（g/100g）；
V1——样品滴定消耗盐酸标准溶液体积（mL）；
V2——空白滴定消耗盐酸标准溶液体积（mL）；
c——盐酸标准滴定溶液浓度（mol/L）；
0.0140 ——1.0mL盐酸 标准滴定溶液相当的氮的质量（g）；
m——样品的质量（g）；
F——氮换算为蛋白质的系数，一般食物为6.25；乳制品为6.38；面粉为5.70；
高梁为6.24；花生为5.46；米为5.95；大豆及其制品为5.71；肉与肉制品为
6.25；大麦、小米、燕麦、裸麦为5.83；芝麻、向日葵5.30。
计算结果保留三位有效数字。
六、注意事项及说明
1、本法也适用于半固体试样以及液体样品检测。半固体试样一般取样范围为2.00g~5.00g；液体样品取样10.0mL~25.0mL（约相当氮30mg~40mg）。若检测液体样品，结果以g/100mL表示。
2、消化时，若样品含糖高或含脂及较多时，注意控制加热温度，以免大量泡沫喷出凯氏烧瓶，造成样品损失。可加入少量辛醇或液体石蜡，或硅消泡剂减少泡沫产生。
3、消化时应注意旋转凯氏烧瓶，将附在瓶壁上的碳粒冲下，对样品彻底消化。若样品不易消化至澄清透明，可将凯氏烧瓶中溶液冷却，加入数滴过氧化氢后，再继续加热消化至完全。
4、硼酸吸收液的温度不应超过40℃，否则氨吸收减弱，造成检测结果偏低。可把接收瓶置于冷水浴中。
5、在重复性条件下获得两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%
七、思考题
1、预习凯氏定氮法测定蛋白质的原理及操作。
2、蒸馏时为什么要加入氢氧化钠溶液？加入量对测定结果有何影响？
3、在蒸汽发生瓶水中、加甲基红指示剂数滴及数毫升硫酸的作用是什么？若在蒸馏过程中才发现蒸汽发生瓶中的水变为黄色，马上补加硫酸行吗？
4、实验操作过程中，影响测定准确性的因素有哪些？

⑤ 常用的蛋白质含量测定方法有哪些

①凯氏定氮法
原理：蛋白质平均含氮量为16%。当样品与浓硫酸共热，蛋白氮转化为铵盐，在强碱性条件下将氨蒸出，用加有指示剂的硼酸吸收，最后用标准酸滴定硼酸，通过标准酸的用量即可求出蛋白质中的含氮量和蛋白质含量。
②双缩脲法
原理：尿素在180℃下脱氨生成双缩脲，在碱性溶液中双缩脲可与Cu2+形成稳定的紫红色络合物。蛋白质中的肽键实际上就是酰胺键，故多肽、蛋白质等都有双缩脲（biuret）反应，产生蓝色或紫色复合物。比色定蛋白质含量。
缺点：灵敏度低，样品必须可溶，在大量糖类共存和含有脯氨酸的肽中显色不好。其 精确度 较差 (数mg)，且会受样品中 硫酸铵 及 Tris 的干扰，但 准确度 较高，不受蛋白质的种类影响。
③Folin酚法(Lowry)
Folin酚法是biuret 法的延伸，所用试剂由试剂甲和乙两部分组成。试剂甲相当于双缩脲试剂（碱性铜试剂），试剂乙中含有磷钼酸和磷钨酸。
在碱性条件下，蛋白质中的巯基和酚基等可将Cu2+还原成Cu+， Cu+能定量地与Folin－酚试剂反应生成蓝色物质，600nm比色测定蛋白质含量。
灵敏度较高(约 0.1 mg)，但较麻烦，也会受 硫酸铵 及 硫醇化合物 的干扰。 步骤中各项试剂的混合，要特别注意均匀澈底，否则会有大误差。
④紫外法
280nm光吸收法：利用Tyr在280nm在吸收进行测定。
280nm-260nm的吸收差法：若样品液中有少量核酸共存按下式计算：
蛋白质浓度(mg/ml)=1.24E280-0.74E260 （280 260为角标）
⑤色素结合法（Bradford 法）
直接测定法：利用蛋白质与色素分子（Coomassie Brilliant Blue G-250）结合物的光吸收用分光光度法进行测定。
考马斯亮兰（CBG）染色法测定蛋白质含量。CBG 有点像指示剂，会在不同的酸碱度下变色；在酸性下是茶色，在中性下为蓝色。当 CBG接到蛋白质上去的时候，因为蛋白质会提供 CBG一个较为中性的环境，因此会变成蓝色。当样本中的蛋白质越多，吸到蛋白质上的CBG也多，蓝色也会增强。因此，蓝色的呈色强度，是与样本中的蛋白质量成正比。
间接测定法：蛋白质与某些酸性或碱性色素分子结合形成不溶性的盐沉淀。用分光光度计测定未结合的色素，以每克样品结合色素的量来表示蛋白质含量的多少。
⑥BCA法
BCA（Bicinchoninc acid procere，4,4’-二羧-2,2’-二喹啉）法与Lowry法相似，主要差别在碱性溶液中，蛋白质使Cu2+转变Cu+后，进一步以BCA 取代Folin试剂与Cu+结合产生深紫色，在波长562 nm有强的吸收。
它的优点在于碱性溶液中BCA 比Folin试剂稳定，因此BCA与碱性铜离子溶液结合的呈色反应只需一步骤即完成。灵敏度Lowry法相似。
本方法对于阴离子、非离子性及二性离子的清洁剂和尿素较具容忍度，较不受干扰，但会受还原糖 及EDTA的干扰。
⑦胶体金测定法
胶体金(colloidal gold)是氯金酸(chloroauric acid)的水溶胶，呈洋红色，具有高电子密度，并能与多种生物大分子结合。
胶体金是一种带负电荷的疏水胶体遇蛋白质转变为蓝色，颜色的改变与蛋白质有定量关系，可用于蛋白质的定量测定。
⑧其他方法
有些蛋白质含有特殊的 非蛋白质基团，如 过氧化物酶含有 亚铁血红素基团，可测 403 nm 波长的吸光来定量之。 含特殊金属的酶 (如镉)，则可追踪该金属。

⑥ 水果中蛋白质含量的检测用什么方法或仪器

食品中蛋白质含量的测定
院系：机械工程学院；专业：食品科学与工程；年级10级；班级：一班；姓名：姜海洋；学号：201044035
摘要
随着食品工业的快速发展，人们对食品中营养元素的要求越来越严格。蛋白质是人体生命的物质基础，是人体重要的营养元素,测定蛋白质的含量有利评价食品的营养价值，合理开发利用食品资源。同时对提高产品质量，优化食品配方有重要意义。
关键字：食品 蛋白质 含量 测定
前言
化学分析是一门以实验动手为基础的理论课程。其主要以化学分析为基础，根据物质分子的一些理化特征：酸碱特性，氧化还原特性等用一些化学试剂、仪器设备等对一些物质成分进行定性定量的分析。当代的化学分析其主要应用于食品行业。通过一些理化特性对食品中的营养素、添加剂、有害物质进行测定，对现在食品的检测、研发等具有重要意义。
蛋白质的组成：
蛋白质是复杂的含氮有机化合物，分子质量很大，主要化学元素为C、H、O、N，在莫些蛋白质中还含有P、S、Cu、Fe、Ⅰ等元素。这些元素在蛋白质中的含量如下表：
元素种类
C
H
O
N
S
该元素含量%
50-60
6-7
20-23
15-17
0.3-2.5
从表中可以看出，蛋白质的平均含氮量为16%，这也是蛋白质元素组成的一个特点，也是凯氏（kjedahl）定氮法测定蛋白质含量的一个计算基础：
蛋白质含量（%）=蛋白质含氮量（%）*6.25
式中6.25即16%的倒数为1g氮含量。由于食物中另外两种重要的营养元素——碳水化合物、脂肪中含有C、H、O，不含N，所以含氮是区别于其他有机物的主要标志。
蛋白质在人体中的重要性及其测定意义：
蛋白质是生命存在的物质基础，是构成生物体细胞组织的重要成分，一切有生命的活体均含有不同类型的蛋白质。蛋白质又是食品的重要组成成分之一，也是食品中重要营养元素指标。蛋白质主要为人体提供必需的氨基酸，在构成蛋白质的20中主要氨基酸中亮氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、苏氨酸、色氨酸和缬氨酸8中氨基酸在人体中不能合成，必须依靠食品提供，在正常情况下，视频提供的总热量中蛋白质提供11%--13%。部分蛋白质是生物催化剂如：酶和激素，以控制机体的生长、消化、代谢、分泌和能量转意等变化，蛋白质还是人体免疫作用所必需的物质，可以形成抗体以预防疾病的感染。因此，蛋白质是人体重要的营养物质也是食品中重要的营养成分，此外，在食品加工过程中，蛋白质及其分解产物对食品色、香、味和产品质量都有一定的影响，。测定食品中蛋白质的含量，对于评价食品的营养价值，合理开发利用食品资源，提高食品加工质量，优化食品配方，核算经济成本和控制生产过程均具有重要意义。
蛋白质测定的方法：
测定蛋白质的方法可分为两类：一类是利用蛋白质的共性即含氮量、肽键和折射率等测定蛋白质含量，另一类是利用蛋白质种特定氨基酸残基、酸性和碱性基团以及芳香基团等测定蛋白质的含量。蛋白质测定最常用的方法是凯氏定氮法，它是测定总有机氮的最常用和操作较简便的方法之一，在国内外普遍使用。此外，双缩脲分光光度法，燃料结合分光光度法，酚试剂法等也常用于蛋白质含量测定，由于方法简便快捷，多用于生产单位质量控制分析。这种检测的方法误差小，而且操作简单，是非常值得提倡的，我们可以根据检测的结果能看出来我们更应该吃什么样的水果了。

⑦ 蛋白质含量测定的标准方法

测定蛋白质的方法可分为两大类：一类是利用蛋白质的共性，即含氮量、肽键和折射率测定蛋白质含量；另一类是利用蛋白质中特定氨基酸残基、酸性和碱性基团以及芳香基团等测定蛋白质含量。常见的方法有：凯氏定氮法、双缩脲法、酚试剂法及紫外吸收法。
1.凯氏定氮法
准备4个50mL凯氏烧瓶并标号，想1、2号烧瓶中加入定量的蛋白质样品，另外两个烧瓶作为对照，在每个烧瓶中加入硫酸钾-硫酸铜混合物，再加入浓硫酸，将4个烧瓶放到消化架上进行消化，之后进行蒸馏，全部蒸馏完毕后用标准盐酸滴定各烧瓶中收集的氨量，直至指示剂混合液由绿色变回淡紫红色，即为滴定终点，结算出蛋白质含量。
2.双缩脲法
双缩脲法是第一个用比色法测定蛋白质浓度的方法，硫铵不干扰显色， Cu2+与蛋白质的肽键，以及酪氨酸残基络合，形成紫蓝色络合物，此物在540nm波长处有最大吸收。首先利用标准蛋白溶液和双缩脲试剂绘制标准曲线，将待测血清与硫酸钠在待测试管中混合，并用只加入硫酸钠不含血清的试管作为对照，将两支试管加入等量的双缩脲试剂，充分混合后于37℃环境中放置10分钟，在540nm波长进行比色，以对照管调零，读取吸光度值，由标准曲线上直接查出蛋白质含量。双缩脲法常用于0.5g/L～10g/L含量的蛋白质溶液测定。
3.酚试剂法
取6支试管分别标号，前5支试管分别加入不同浓度的标准蛋白溶液，最后一支试管加待测蛋白质溶液，不加标准蛋白溶液，每支试管液体总量通过加入蒸馏水补足而保持一致，将液体混合均匀，在室温下放置30分钟，以未加蛋白质溶液的第一支试管作为空白对照，于650nm波长处测定各管中溶液的吸光度值
4.紫外吸收法
大多数蛋白质在280nm波长处有特征的最大吸收，这是由于蛋白质中有酪氨酸，色氨酸和苯丙氨酸存在，可用于测定0.1～0.5mg/mL含量的蛋白质溶液。取9支试管分别标号，前8支试管分别加入不同浓度的标准蛋白溶液，1号试管不加标准蛋白溶液，最后一支试管加待测蛋白质溶液，而不加标准蛋白溶液，每支试管液体总量通过加入蒸馏水补足而保持一致，将液体混合均匀，在280nm波长处进行比色，记录吸光度值。

⑧ 蛋白含量测定的最常用的是什么方法

蛋白质含量测定法，是生物化学研究中最常用、最基本的分析方法之版一。目前常用的有四权种古老的经典方法，即定氮法，双缩尿法（Biuret法）、Folin－酚试剂法（Lowry法）和紫外吸收法。另外还有一种近十年才普遍使用起来的新的测定法，即考马斯亮蓝法（Bradford法）。其中Bradford法和Lowry法灵敏度最高，比紫外吸收法灵敏10～20倍，比Biuret法灵敏100倍以上。定氮法虽然比较复杂，但较准确，往往以定氮法测定的蛋白质作为其他方法的标准蛋白质。
值得注意的是，这后四种方法并不能在任何条件下适用于任何形式的蛋白质，因为一种蛋白质溶液用这四种方法测定，有可能得出四种不同的结果。每种测定法都不是完美无缺的，都有其优缺点。在选择方法时应考虑：①实验对测定所要求的灵敏度和精确度；②蛋白质的性质；③溶液中存在的干扰物质；④测定所要花费的时间。
考马斯亮蓝法（Bradford法），由于其突出的优点，正得到越来越广泛的应用。

⑨ 考马斯亮蓝法测蛋白质含量用到哪些仪器

蛋白质的存在影响酸碱滴定中所用某些指示剂的颜色变化，从而改变这些染料的专光吸收。在些基础上发展了蛋属白质染色测定方法。涉及的指示剂有甲基橙、考马斯亮蓝、溴甲酚绿和溴甲酚紫。目前广泛使用的染料是考马斯亮蓝。
考马斯亮蓝G-250在酸性溶液中为棕红色，当它与蛋白质通过范德华键结合后，变为蓝色，且在蛋白质一定浓度范围内符合比尔定律，可在595nm处比色测定。2—5分钟即呈最大光吸收，至少稳定1小时。在0.01—1.0 mg蛋白质/ml范围内均可。该法操作简便迅速，消耗样品量少，但不同蛋白质之间差异大，且标准曲线线性差。高浓度的Tris、EDTA、尿素、甘油、蔗糖、丙酮、硫酸铵和去污剂时测定有干扰。缓冲液浓度过高时，改变测定液pH值会影响显色。考马斯亮蓝染色能力强，比色杯不洗干净会影响光吸收值，不可用石英怀测定

⑩ 国家标准检测蛋白质含量测定方法

蛋白质含量测定方法就是检测N元素的含量，像三聚氰胺的问题，就是通过增加N的含量使“蛋白质”含量提高的。

国家标准检测蛋白质含量的方法叫做凯氏定氮法，食物中的蛋白质在催化加热条件下分解，导致氨和硫酸结合产生硫酸铵。 碱蒸馏采用无硫，硼酸吸收，用硫酸或盐酸标准滴定溶液滴定，根据酸耗计算氮含量，再乘以转化系数，即蛋白质含量。

具体操作步骤如下：

1.样品处理

精确称量0.2-2.0g固体样品或2-5g半固体样品或吸收10-20ml液体样品（约30-40mg氮当量）。将其转移至干燥的100毫升或500毫升氮气固定瓶中，加入0.2克硫酸铜，6克硫酸钾和20毫升硫酸，轻轻摇动，在瓶口放置一个小漏斗，将瓶子倾斜石棉网上有45度角，有小孔。

加热小火后，内容物碳化，泡沫完全停止，加强火力，保持瓶内液体稍微沸腾，直至液体呈蓝绿色澄清透明，然后继续加热0.5小时。取出并冷却，小心加入20毫升水，冷却，移入100毫升容量瓶中，用少量水洗净氮气瓶，洗净液放入容量瓶中，然后用水冲洗至刻度，混匀备用。

取相同量的硫酸铜，硫酸钾和浓硫酸作为试剂进行空白试验。然而，这种方法很危险，很难在实验室中证明。大多数实验室都有一个消化器，可以一次处理16个以上的样品和一个可以自行设定温度的呼吸机。它更安全，更可操作。

(10)蛋白质含量测定需要哪些仪器扩展阅读

除了凯氏定氮法以外，标准的测量方法还有：

• 分光光度法

食品中的蛋白质在催化加热条件下被分解，分解产生的氨与硫酸结合生成硫酸铵，在pH4.8的乙酸钠-乙酸缓冲溶液中与乙酰丙酮和甲醛反应生成黄色的3,5-二乙酰-2,6-二甲基-1,4-二氢化吡啶化合物。在波长400nm 下测定吸光度值，与标准系列比较定量,结果乘以换算系数，即为蛋白质含量。

• 燃烧法

样品在900~1200℃下燃烧。在燃烧过程中，产生混合气体。 诸如碳，硫和盐的干扰气体被吸收管吸收，氮氧化物被还原成氮。 形成的氮气流由热导检测器（TCD）检测。