测dna和rna浓度仪器有什么
① 紫外吸收法测定DNA浓度的仪器叫什么
紫外分光光度计
② DNA、RNA检测试剂分别是什么
甲基绿和吡罗红的混合液
DNA与甲基绿亲和力大,被染成绿色
RNA与吡罗红亲和力大,被染成红色,
③ DNA或RNA样品不纯,用紫外分光光度计测定其浓度和纯度的准确性会受到影响,为什么
分光光度计
分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸,蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸,单链、双链DNA,以及RNA。核酸在波长 260 nm处有最高吸收峰。吸收紫外光的性质是嘌呤环和嘧啶环的共轭双键系统所具有的,所以嘌呤和嘧啶以及一切含有它们的物质,不论是核苷、核苷酸或核酸都有吸收紫外光的特性。但紫外法不能区分DNA和RNA,只能用来鉴定核酸的纯度和含量。
蛋白质由于含有芳香氨基酸,因此也能吸收紫外光。通常蛋白质的吸收高峰在280nm波长处,在260nm处的吸收值公为核酸的十分之一或更低,故核酸样品中蛋白质含量较低时对核酸的紫外测定影响不大。RNA的260nm与280nm吸收的比值在2.0以上;DNA的260nm与280nm吸收的比值则在1.9左右。当样品中蛋白质含量较高时比值即下降。
分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源,通过系列分光装置,从而产生特定波长的光源,光源透过测试的样品后,部分光源被吸收,计算样品的吸光值,从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。
核酸的定量
DNA和RNA都有吸收紫外光的性质,它们的吸收高峰在260nm波长处,每种核酸的分子构成不一, 因此其换算系数不同。定量不同类型的核酸,事先要选择对应的系数。如:1OD 的吸光值分别相当于50μg / ml 的dsDNA,37μg / ml 的ssDNA, 40μg/ml的RNA,30μg/ml的寡核苷酸。测试后的吸光值经过上述系数的换算,从而得出相应的样品浓度,这些由分光光度计内预设的程序执行,因此,测试前选择正确的程序,测试样品的类型,首先测试空白液,然后再测试样品,注意输入样品稀释倍数。
如何避免吸光值漂移
读数不稳定可能是实验者最头痛的问题。灵敏度越高的仪器, 表现出的吸光值漂移越大。事实上,分光光度计的设计原理和工作原理,允许吸光值在一定范围内变化,即仪器有一定的准确度和精确度。
核酸本身物化性质
溶解核酸的缓冲液的pH 值、离子浓度等
在测试时,离子浓度太高也会导致读数漂移,因此建议使用pH 值一定、离子浓度较低的缓冲液(如TE)可大大稳定读数。核酸的吸光值受pH值和缓冲液离子浓度影响。只有在一定的pH值和低离子浓度的条件下(如10 mM Tris-HCl pH 8.0),才能得到精确的检测结果。水的pH值不稳定,可能导致检测误差。一些缓冲液在紫外范围内存在自身吸收,为了确保准确测量,请使用与悬浮或洗脱样品时相同的缓冲液。
样品的稀释浓度
同样是不可忽视的因素,由于样品中不可避免存在一些细小的颗粒,尤其是核酸样品。这些小颗粒的存在干扰测试效果。为了最大程度减少颗粒对测试结果的影响,要求核酸吸光值至少大于0.1A ,吸光值最好在0.1-1.5 A。在此范围内,颗粒的干扰相对较小,结果稳定。从而意味着样品的浓度不能过低,或者过高(超过光度计的测试范围)。
操作因素
如混合要充分,否则吸光值太低, 甚至出现负值;混合液不能存在气泡,空白液无悬浮物,否则读数漂移剧烈;必须使用相同的比色杯测试空白液和样品,否则浓度差异太大;换算系数和样品浓度单位选择一致;不能采用窗口磨损的比色杯;样品的体积必须达到比色杯要求的最小体积等多个操作事项。
各波长具体含义及相关问题1. A260nm
是核酸最高吸收峰的吸收波长,最佳测量值的范围为0.1至1.0。如果不在此范围,稀释或浓缩样品,使之在此范围内;如果吸光度小于0.05,检查是否存在操作因素(如移液不准确,样品内有悬浮物等)影响。DNA样品的A260 吸光度值是否>0.1。(请注意,这个值跟仪器无关,核酸的吸光度必需大于0.1,其值才有效和可靠,因为样品中的杂质和颗粒这些不纯物的干扰通常会对光有一定吸收,其值<0.1);
朗伯-比尔定律:
A 吸光值
I0 入射光强度
I 投射光强度
c 吸光物质的摩尔浓度(mol/L)
d 光通过的液层厚度(cm)
ε 摩尔吸光系数(Lmol-1cm-1)
2. A280nm
是蛋白和酚类物质最高吸收峰的吸收波长,比值可进行核酸样品纯度评估:纯DNA的A260/A280比值为1.8,纯RNA为2.0。如果比值低,表示受到蛋白(芳香族)或酚类物质的污染,需要纯化样品。比值=1.5相当于50%蛋白质/DNA溶液
3. A230nm
是碳水化合物最高吸收峰的吸收波长,比值可进行核酸样品纯度评估:纯DNA和 RNA的A260/A230比值为2.5。若比值小于2.0标明样品被碳水化合物(糖类)、盐类或有机溶剂污染,需要纯化样品。A230产生负值主要是由于在很低DNA 浓度的溶液中的一些其他成分的干扰所导致的。在下一个测定中,需要降低样品的稀释度,A230的负值会被校正。
4. A320nm或A340nm
为检测溶液样品的浊度和其他干扰因子。该值应该接近0.0。如果不是,标明溶液中有悬浮物,需要纯化样品。纯样品的A320一般是 0。
5. A260/A280和A260/A230
是核酸纯度的指示值,纯度好的DNA,在pH7-8.5 下其比值应该在2.0 或2.5,A260 / A280的比值, 用于评估样品的纯度, 因为蛋白的吸收峰是280 nm。 纯净的样品比值大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。如果比值低于1.8 或者2.0,表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。
A230是多肽、芳香基团、苯酚和一些碳氢化合物的吸光度,A230表示样品中存在一些污染物,如碳水化合物、多肽、苯酚等,较纯净的核酸A260/A230的比值大于2.0 。A280是蛋白质的吸光度。
④ DNA、RNA、蛋白定量仪器
你说的仪器只有微量紫外分光光度计,这东西不可能低于一万的,国产的也是十内万级容的,美国热电公司的都是几十万级的。不过普通的紫外分光光度计便宜,可以更换微量的比色皿达到微量测量的目的,但也不会少于一万,涉及到紫外检测器的仪器都不可能低于一万,除非是二手。
⑤ 核酸检测实验室主要仪器有哪些
1、核酸提取仪
核酸提取仪是实验室的必备仪器,应用配套的核酸提取试剂能够自动完成样本核酸的提取工作。核酸提取仪是通过磁珠提取法研制出来的一种高通量、高灵敏度的自动核酸纯化提取设备。可以利用机器磁棒架上的磁棒,将吸附有核酸的磁珠移动至不同试剂孔内,经过细胞裂解、核酸吸附、清洗与洗脱等处理,即可得到高纯度的核酸。
2、离心机
离心机也是实验室最基本的仪器,主要是血液离心和DNA、RNA样品核酸提取时用。这里推荐湖南可成离心机。
迷你离心机可使用可成Super MiniStar迷你离心机,微型离心机外观新颖独特,灵巧多用,配备两种离心转子和多种试管套,适用于1.5ml、0.5ml、0.2ml离心管和PCR用0.2ml,8连排离心管。
台式高速离心机使用可成台式高速离心机1-16K,该机型体积小,占用空间小,微机控制,配微量转子,离心速度上升快,离心效率高,常用于DNA样品核酸提取。
台式低温高速离心机可用可成台式高速冷冻离心机 1-16KR,此机型体积小巧,设计紧凑,进口高能效环保制冷系统,具有优良的温度控制性能,制冷快,是RNA样品核酸提取的理想选择。
台式低速离心机推荐使用可成台式低速离心机4-5N,此机型采用无碳刷变频电机,操作宁静噪音低,可快速分离血清。且离心腔内设有独立紫外线灭菌装置,能使细菌、病毒丧失生存力及繁殖力进而消灭细菌、病毒,达到消毒灭菌成效。
⑥ 检测DNA和RNA检测方法有什么区别
您好!检测DNA的方法有:1.光密度测定。2.琼脂糖电泳凝胶检测法。回3。二苯胺法。
检测RNA的方法有:1.光密度测答定。2.苔黒酚法。
主要的嘧啶和嘌呤具有共轭双键,使碱基,核苷,核苷酸和核酸在240-290nm的紫外波段有一段强烈的吸收峰,因此核酸具有紫外吸收特性,在260nm,处是最大的紫外光吸收值,根据朗波-比尔光吸收定律来计算出核酸含量。
⑦ 如何测量RNA浓度
1、超微量分光光度计测260nm吸收值计算。
可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸,单链、双链DNA,以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波长260 nm。
2、也可以用RNA胶(凝胶成像)检测。例如:原核生物的核糖体所含的rRNA有5S、16S及23S三种。在胶上就有三条明显大小不一的条带。凝胶迁移分析。可以用来研究RNA-蛋白相互作用。基本原理是:结合了蛋白的RNA在凝胶中的迁移速率更慢,因而可以区分出结合蛋白与未结合蛋白的RNA条带。
(7)测dna和rna浓度仪器有什么扩展阅读
1、RNA的功能是:
(1)具有肽酰转移酶的活性。
(2)为tRNA提供结合位点。
(3)在蛋白质合成起始时,参与同mRNA选择性的结合,在肽链的延伸中与mRNA结合。
2、原核生物的rRNA分三类:5SrRNA、16SrRNA和23SrRNA。
真核生物的rRNA分四类:5SrRNA、5.8SrRNA、18SrRNA和28SrRNA。
S为大分子物质在超速离心沉降中的一个物理学单位,可间接反映分子量的大小。原核生物和真核生物的核糖体均由大、小两种亚基组成。
3、凝胶成像对DNA或RNA胶 进行切胶、拍照、观察、分析的实验室类仪器,凝胶成像系统可以应用于分子量计算、密度扫描、密度定量、PCR定量等生物工程常规研究。
⑧ 用什么方法检测产品是否含有DNA 和rna
DNA和RNA作为遗传物质,本身都有自己的特性,用于检测的方法也有很多,如下:
首先我们要知道:
DNA:为双链结构,由A 、C 、G、T组成,链有外显子和内含子区域,物质性质中A260/A280在1.8左右,在260nm出有最大吸收峰。
tRNA的二级和高级结构
1、抽提试剂盒分别抽提:将产品分成两份,其中一份用来抽提DNA,此样本加入RNA 酶,另一份用来抽提RNA,此样本加入Dnase I,由此抽提出来的核酸进行琼脂糖凝胶电泳或者aligent 4200/2100仪器检测,考虑到DNA和RNA可能会降解,只有样本完好时,才能轻易地辨别出来。
2、qPCR技术:如1中所示,用1中的样本进行qPCR验证,设计引物时DNA样本跨外显子区域,或者是单独设计内含子区,加标准品对照,RNA正常设计即可,由此得出的结果可以根据扩增长度和两个结果进行判定。
以上为两个最基本的方法,操作简单,成本可控,两个结合起来结果准确,当然还有一些其他的方法,并设计对照试验,采用控制变量法进行研究。
⑨ 鉴定DNA 和RNA分布所用的试剂是。。。
健那绿染液
⑩ 哪些型号的酶标仪可以检测rna dna 纯度
不叫酶标仪吧,叫分光光度计,比较多人用nanodrop,进口的比较贵,也有国产的,是根据吸光度检测的,一般酶标仪是用来检测免疫反应的,elisa出来的浓度